Vero細(xì)胞制備H5N1流感大流行疫苗的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、流感病毒是引起流行性感冒的病原體，具有高度傳染性，極易發(fā)生流行，甚至達(dá)到世界范圍的大流行，每次大流行都造成了巨大的人力資源和物力資源的損失。目前H5N1人用禽流感疫苗主要是以雞胚為培養(yǎng)基質(zhì)研發(fā)生產(chǎn)，然而當(dāng)H5N1禽流感暴發(fā)時(shí)，難于在短期內(nèi)提供足夠的雞胚來(lái)生產(chǎn)疫苗。此外，雞胚中可能帶有的外源性因子也影響疫苗的質(zhì)量。非洲綠猴腎細(xì)胞Vero是WHO推薦的疫苗生產(chǎn)細(xì)胞，可采用微載體發(fā)酵罐進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。獲得流感病毒Vero細(xì)胞高產(chǎn)適應(yīng)株對(duì)于流感

2、疫苗的生產(chǎn)具有重要意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)以傳統(tǒng)遺傳重配技術(shù)獲得H5N1流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株，制備Vero細(xì)胞H5N1流感疫苗。以流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株A/Yunnan/1/2005（H3N2）va為母株與反向遺傳學(xué)技術(shù)改造的禽流感病毒疫苗株A/Anhui/1/2005（H5N1）共同感染SPF雞胚或Vero細(xì)胞，用抗A/Yunnan/1/2005（H3N2）va羊抗體篩選，血凝抑制試驗(yàn)和基因測(cè)序鑒定病毒型別。結(jié)果表明：通

3、過(guò)流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株與流行株的重配和抗體篩選，獲得了1株高產(chǎn)的H5N1流感病毒Vero細(xì)胞適應(yīng)株。同時(shí)進(jìn)行了重配毒株的一些生物學(xué)試驗(yàn)：病毒感染性滴度為1×107.2PFU/ml、流感特異性免疫熒光陽(yáng)性、電子顯微鏡下可觀察到完整的病毒顆粒、與H5N1標(biāo)準(zhǔn)抗血清瓊脂糖板上形成明顯的沉淀圈；且該毒株對(duì)雞胚和小鼠不具有致毒性。
　　 對(duì)該重配病毒株進(jìn)行微載體培養(yǎng)，優(yōu)化培養(yǎng)條件。其中，以DMEM/F12為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，進(jìn)行的有血清微