紫杉醇納米藥物聯(lián)合放療對宮頸癌協(xié)同治療作用的研究.pdf

1、目的：研究紫杉醇納米藥物聯(lián)合放療對宮頸癌的抑制作用，并探索其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：首先，使用固體沉淀法完成不同理論載藥率的紫杉醇納米藥物（PTX-NPs）的制備，并通過高效液相色譜儀（HPLC）對其實(shí)際載藥率（DL）、包封率(EE)及體外釋放速率進(jìn)行測量，使用動態(tài)光散射儀(DLS)對粒徑及納米藥物穩(wěn)定性進(jìn)行評估，在使用透射電鏡儀（TEM）觀察紫杉醇納米藥物的形貌，在體外通過宮頸癌Hela細(xì)胞，使用四氮唑化合物(MTT法)測量了紫杉

2、醇納米藥物和Taxol?小的細(xì)胞毒性。在對負(fù)Hela宮頸癌的裸鼠進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將瘤體積生長到約200mm3左右的裸鼠隨機(jī)分為6組：NS組（對照組）、PTX組、PTX-NPs組、RT組、PTX+RT組和PTX-NPs+RT組(n=12)，并分別予以NS、PTX2.5mg/kg或放療15Gy/5F處理。治療結(jié)束后24小時(shí)，在NS組、PTX+RT組和PTX-NPs+RT組中分別隨機(jī)選取3只裸鼠，對其進(jìn)行18F-脫氧葡萄糖正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層

3、現(xiàn)象(18F-FDG PET/CT)掃描顯像，評估其宮頸癌腫瘤早期代謝情況，然后隨機(jī)處死每組一半的裸鼠，并立即剝?nèi)√幩缆闶蟮牧鼋M織，以行宮頸癌腫瘤細(xì)胞增殖（Ki-67）、腫瘤微血管密度(MVD)（CD31）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）相關(guān)指標(biāo)的免疫組化，并觀察所有剩余裸鼠腫瘤的體積生長變化及各組裸鼠生存情況。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)中所制備的不同理論載藥率的紫杉醇納米藥物中，8％的PTX-NPs與6%或10%的理論載藥率的PTX-NPs

4、相比較，有更好的實(shí)際載藥率（7.96±0.06%）及包封率（99.78±0.34%），在TEM成像觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)，紫杉醇納米藥物在水溶液的中均成球形狀態(tài)，且分散均勻，這也證實(shí)了其在DLS中所測得的粒徑大小(45.71±0.32nm)及粒徑多分散指數(shù)(PDI）（0.19±0.02）。除此之外，紫杉醇納米藥物在實(shí)驗(yàn)溫度為4℃或25℃的環(huán)境條件中，且沒有使用任何溶液穩(wěn)定劑的情況下，能在PBS或含10%胎牛血清的PBS中穩(wěn)定保持其粒徑大小及多分散指

5、數(shù)至48小時(shí)。在紫杉醇納米藥物的體外釋放實(shí)驗(yàn)中，與游離紫杉醇相比，PTX-NPs表現(xiàn)為緩慢釋放模式，且沒有觀察到明顯的突釋現(xiàn)象，在第14天時(shí)，紫杉醇納米藥物累積釋放紫杉醇63.84%。在體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)PTX-NPs在紫杉醇濃度大于4μg/mL時(shí)，其對Hela細(xì)胞的毒性比Taxol?小(P＜0.05)，而當(dāng)紫杉醇濃度小于4μg/mL時(shí)，紫杉醇納米藥物和Taxol?兩者的細(xì)胞毒性差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在體內(nèi)試驗(yàn)中，在第

6、22天時(shí)，PTX-NPs+RT組瘤體積(623.5mm3)與PTX+RT組(1121.4mm3, P＜0.01)、RT組(1176.9mm3, P＜0.01)、PTX-NPs組(2074.1mm3, P＜0.01)、PTX組(2197.2mm3, P＜0.01)以及NS組(2347.2mm3, P＜0.01)相比較，能明顯抑制宮頸癌腫瘤的體積生長，且PTX-NPs+RT組裸鼠的中位生存期為87天，明顯長于PTX+RT組的61天， P＜0

7、.01）、RT組(64天, P＜0.01）、PTX-NPs組(31天, P＜0.01）、PTX組(34天, P＜0.01）以及NS組(25天, P＜0.01）， PET/CT顯像觀察到PTX-NPs+RT組裸鼠腫瘤的T/M值（1.182±0.043）與PTX+RT組（2.032±0.214）、NS組（2.635±0.074）相比，腫瘤組織的代謝更低(P＜0.05)。在行宮頸癌瘤組織免疫組化探索相關(guān)機(jī)制的試驗(yàn)中觀察到， PTX-NPs+R

8、T組的Ki-67陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)(21.7±7.5%)明顯低于PTX+RT組(40.6±4.4%, P＜0.05)、RT組(57.2±5.0%, P＜0.05)、NPs組(73.2±5.8%, P＜0.05)、PTX組(79.6±6.2%, P＜0.05)以及NS組(87.2±4.0%, P＜0.05)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；腫瘤組織中CD31陽性的微血管密度（MVD）(2.1±0.3%)明顯少于PTX+RT組(3.8±0.4%,

9、P＜0.05)、RT組(4.2±0.8%, P＜0.05)、NPs組(8.7±0.7%, P＜0.05)、PTX組(9.0±0.4%, P＜0.05)以及NS組(9.8±0.7%, P＜0.05)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；并且，PTX-NPs+RT組VEGF陽性率（30.7±4.0%）也明顯低于PTX+RT組(85.6±3.5%, P＜0.01)，RT組(89.7±3.5%, P＜0.01)，NPs組(75.7±3.2%, P＜0.01),P

10、TX組(77.4±5.1%, P＜0.01)以及NS組(80.0±5.0%, P＜0.01)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1、實(shí)驗(yàn)中我們所制備的理論載藥率為8%的紫杉醇納米藥物具有良好的包封率、載藥率及穩(wěn)定性，在水溶液中成單一分散的球形狀態(tài)，其在體外呈緩慢釋放模式，體外細(xì)胞毒性更小。2、實(shí)驗(yàn)中所使用的PTX-NPs劑量小，其聯(lián)合放療能有效抑制宮頸癌腫瘤大小的生長并延長裸鼠的中位生存期，PET/CT掃描顯像結(jié)果表明PTX-NPs聯(lián)