wnt-β-catenin信號(hào)通路在紫杉醇治療宮頸癌中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究wnt/β-catenin信號(hào)通路在紫杉醇治療宮頸癌中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1. MTT比色法檢測(cè)不同濃度紫杉醇對(duì)人宮頸癌Caski細(xì)胞株增殖的影響。
　　收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宮頸癌 Caski細(xì)胞，孵育至細(xì)胞貼壁后加入濃度分別為1000.00μg/ml、100.00μg/ml、10.00μg/ml、1.00μg/ml、0.10μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml的紫杉醇溶液各

2、100μl，每組溶液濃度設(shè)五個(gè)復(fù)孔，孵育48小時(shí)后，每孔加入0.5％MTT溶液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)約4小時(shí)。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD570nm處測(cè)量各孔的吸光值(OD)，計(jì)算抑制率，得出IC50，用于下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2.紫杉醇對(duì)Caski細(xì)胞中β-catenin蛋白表達(dá)的影響
　　24孔板孔內(nèi)放入蓋玻片重新培養(yǎng)Caski細(xì)胞，對(duì)照組未予紫杉醇處理，而實(shí)驗(yàn)組則加入紫杉醇（IC50終濃度6.04nmol/L），溫箱中孵育48h后，β

3、-catenin蛋白表達(dá)采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。高倍光鏡下（S-P法╳400）觀察染色結(jié)果，計(jì)算陽(yáng)性率。
　　3.紫杉醇對(duì)Caski細(xì)胞中c-myc的mRNA表達(dá)的影響
　　24孔板孔內(nèi)培養(yǎng)Caski細(xì)胞，在實(shí)驗(yàn)組中加入紫杉醇溶液終濃度6.04nmol/L，對(duì)照組加等體積培養(yǎng)液，溫箱中孕育48小時(shí)后，各組細(xì)胞c-myc基因表達(dá)應(yīng)用qRT-PCR法檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組β-catenin蛋白

4、于胞質(zhì)及胞核中均有表達(dá)，對(duì)照組棕黃色顆粒者更致密，呈團(tuán)塊狀。實(shí)驗(yàn)組β-catenin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為39.3%，對(duì)照組β-catenin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為71.7%。實(shí)驗(yàn)組中陽(yáng)性率明顯減少（P<0.05）。
　　2．經(jīng)檢測(cè)c-myc的mRNA在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組Caski細(xì)胞中均有表達(dá)，癌基因c-myc mRNA含量實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯下降（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　紫杉醇作用Caski細(xì)胞后β-catenin蛋白表達(dá)