吉非替尼在荷瘤裸鼠體內(nèi)的時(shí)辰藥動(dòng)學(xué)及其機(jī)制.pdf

1、目的:
　　本研究通過建立Balb/c裸鼠皮下移植瘤模型，探究吉非替尼時(shí)辰給藥的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)，并從代謝酶、受體通路及時(shí)辰基因的角度探討其可能的機(jī)制。
　　方法:
　　1.裸鼠皮下移植瘤模型的建立與隨機(jī)分組：將Balb/c裸鼠置于嚴(yán)格的人工控制的12 h明期-12 h暗期（07:00開燈，19:00關(guān)燈)的條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)2周。于右上肢皮下接種HCC827細(xì)胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型。將造模成功的裸鼠隨機(jī)分為08:00、1

2、2:00、16:00、20:00、24:00及次日04:00六個(gè)時(shí)辰組。每個(gè)時(shí)辰組又隨機(jī)分為給藥組和模型組，并將模型組隨機(jī)分為9個(gè)取血點(diǎn)組。另外，每個(gè)時(shí)辰點(diǎn)各隨機(jī)加入未種瘤的正常裸鼠作為對照組。
　　2.時(shí)辰給藥及血漿、肝組織樣本的獲?。航o藥組裸鼠在相應(yīng)時(shí)辰點(diǎn)給予1.0 mg·kg-1吉非替尼混懸液，并于給藥后0 h、15、30 min、1、3、5、7、9、16、24h摘眼球取血。將血液離心得到血漿并低溫保存。取血后立即脫臼處死裸

3、鼠，取肝組織冷凍保存。
　　3.血藥濃度檢測：采用高效液相色譜法聯(lián)合質(zhì)譜（high-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）的方法檢測各個(gè)時(shí)辰點(diǎn)吉非替尼的血藥濃度，并用WinNonlin6.3計(jì)算各時(shí)辰點(diǎn)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。
　　4.相關(guān)基因表達(dá)水平的檢測：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantificatio

4、nal real time-polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測裸鼠肝組織中細(xì)胞色素P-450酶3a11（cytochrome P450 enzyme3a11，cyp3a11）、cyp3a13、孕烷X受體（pregnane X receptor，PXR）、組成型雄甾烷受體（constitutive androstane receptor，CAR）及相關(guān)時(shí)辰基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.

5、8:00給藥組吉非替尼的AUC(0-24h)明顯高于其他給藥組，清除率明顯高于其他各組。對于MRT(0-24h)，8:00、24:00、4:00給藥組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但均高于12:00、16:00、20:00給藥組（P<0.05）。16:00、20:00給藥組的AUC(0-24h)較低，其清除率較高（P<0.05）。
　　2.各時(shí)辰點(diǎn)模型組的cyp3a11、cyp3a13、PXR、CAR、Per1、Per2和Bmal1 mRN

6、A的表達(dá)具有晝夜節(jié)律性。cyp3a11、PXR和CAR mRNA在16:00到24:00之間表達(dá)較高，在20:00達(dá)到峰值，cyp3a13在16:00、20:00和24:00均有較高的表達(dá)（P<0.05）。Bmal1mRNA的表達(dá)在20:00時(shí)達(dá)到峰值，Per1、Per2在4:00表達(dá)較高（P<0.05）。給與吉非替尼后，20:00給藥組cyp3a11、PXR、CAR mRNA24 h的總體表達(dá)水平最高。12:00給藥組cyp3a13

7、mRNA24 h的總體表達(dá)水平最高。Bmal1 mRNA24 h的總體表達(dá)水平在20:00給藥組最高，這與代謝酶的表達(dá)趨勢相吻合。Per1 mRNA24 h的總體表達(dá)水平在24:00、4:00給藥組較高，在20:00給藥組最低。Per2 mRNA24 h的總體表達(dá)水平在8:00、12:00、24:00給藥組較高，這與代謝酶的表達(dá)相反，但與血藥濃度的變化相吻合。
　　結(jié)論:
　　吉非替尼在荷瘤裸鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程因給藥時(shí)間的不