PS修飾姜黃素納米脂質(zhì)載體的制備、表征及體外抗炎藥效學(xué)研究.pdf

1、目前，動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病已成為威脅人類健康的重大疾病之一。目前臨床上常用的抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物如他汀類、貝特類等雖然降血脂效果明顯，但不良反應(yīng)較多，如他汀類會(huì)引起橫紋肌的溶解等。近年來研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素（curcumin， Cur）具有抗炎、抗氧化、抗凝血、清除自由基、降血脂等多方面抗動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）的藥理作用，而且毒性低、不良反應(yīng)少，成為研究的熱點(diǎn)。
　　據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，磷脂酰絲氨酸（phosp

2、hatidylserine, PS）大量存在于凋亡細(xì)胞的外膜，能高效識(shí)別巨噬細(xì)胞上的受體而實(shí)現(xiàn)巨噬細(xì)胞靶向性，誘導(dǎo)生物體內(nèi)凋亡細(xì)胞的清除，而巨噬細(xì)胞又是AS斑塊的主要炎癥細(xì)胞。因此本課題擬采用生物內(nèi)源性的PS為膜材對(duì)納米脂質(zhì)載體進(jìn)行修飾，通過簡(jiǎn)單的物理結(jié)合，以具有明顯抗炎作用的Cur為模型藥物進(jìn)行包載，制備PS修飾的姜黃素納米脂質(zhì)載體。期望不僅可以提高姜黃素的水溶性和穩(wěn)定性，還可以借助PS介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞靶向作用增加納米脂質(zhì)載體在巨噬細(xì)胞

3、的聚集，同時(shí)借助于藥物與載體的協(xié)同作用，更好地發(fā)揮抗炎療效。
　　目的:制備PS修飾的姜黃素納米脂質(zhì)載體（curcumin-loaded nanostructured lipid carriers, Cur-NLC），對(duì)其處方和制備工藝進(jìn)行優(yōu)化，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行考察，然后對(duì)載體及制劑的安全性進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)藥物與載體的體外協(xié)同抗炎藥效學(xué)進(jìn)行研究。
　　方法:本文首先確定磷脂酰絲氨酸的摩爾比例，即磷脂酰絲氨酸的修飾程度，在此基

4、礎(chǔ)上分別制備了不同磷脂酰絲氨酸修飾的姜黃素納米脂質(zhì)載體。采用薄膜分散法制備Cur-NLC，以粒徑和包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用單因素和正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化其處方和制備工藝；采用透射電鏡觀察Cur-NLC的外觀形態(tài)，激光粒度分析儀測(cè)定其粒徑、粒徑分布及Zeta電位，透析法測(cè)定Cur-NLC的體外釋放行為；采用溶血實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)考察載體及制劑的安全性；采用激光共聚焦掃描顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察載體對(duì)巨噬細(xì)胞的靶向性；通過油紅O染色觀察和總膽固醇的含量

5、測(cè)定來評(píng)價(jià)Cur-NLC對(duì)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝取行為的影響；采用反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)（RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）研究Cur-NLC對(duì)巨噬細(xì)胞致炎因子和抗炎因子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果:在優(yōu)化條件下制備的不同磷脂酰絲氨酸摩爾比例修飾的Cur-NLC外觀呈球形或類球形，平均粒徑均在200 nm左右，粒徑分布均勻；隨著磷脂酰絲氨酸修飾程度的增加，Cur-NLC的表面負(fù)電位逐漸下降；包封率均大于80％；載藥量均大于2

6、%；體外釋放行為顯示Cur-NLC具有明顯的緩釋特性，體外釋藥曲線方程擬合結(jié)果表明，不同磷脂酰絲氨酸修飾的Cur-NLC的體外釋放曲線均符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同磷脂酰絲氨酸修飾的Cur-NLC的溶血率均小于5%，說明載體材料血液相容性良好。MTT結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)中所用的載體和制劑均沒有細(xì)胞毒性。巨噬細(xì)胞靶向攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PS的修飾比例為8%時(shí)，巨噬細(xì)胞對(duì)Cur-NLC有最大攝取。油紅O染色和細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量測(cè)定結(jié)果顯

7、示，PS空白載體組對(duì)巨噬細(xì)胞脂質(zhì)攝取無明顯影響，姜黃素溶液組能顯著抑制巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)沉積，而兩者結(jié)合后其抑制能力顯著增強(qiáng)，可能是由于PS增加了姜黃素的巨噬細(xì)胞靶向性。RT-PCR和ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PS空白載體組和姜黃素溶液組均能在基因和蛋白水平上抑制巨噬細(xì)胞致炎因子（MCP-1、TNF-α和IL-6）的分泌，促進(jìn)抗炎因子（TGF-β和IL-10）的合成，而兩者結(jié)合后，該調(diào)節(jié)作用進(jìn)一步增強(qiáng)，表明PS和姜黃素具有協(xié)同的抗炎作用。

8、r>　　結(jié)論:本文建立了姜黃素納米脂質(zhì)載體含量測(cè)定的體外分析方法，線性關(guān)系良好，靈敏度高。采用薄膜分散法制備Cur-NLC，微柱離心法測(cè)定包封率，優(yōu)化條件下制備的Cur-NLC，粒徑較小且分布均勻，包封率和載藥量均良好。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米脂質(zhì)載體在4℃條件下放置一周性質(zhì)穩(wěn)定。溶血實(shí)驗(yàn)表明，不同的Cur-NLC制劑血液相容性均良好。MTT結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)濃度下不同PS修飾的Cur-NLC對(duì)細(xì)胞均安全無毒。藥物與載體的協(xié)同抗炎藥效學(xué)結(jié)果