喹諾酮類藥物誘導(dǎo)銅綠假單胞菌后對(duì)其生物膜形成能力影響的研究.pdf

1、目的：
　　用喹諾酮類藥物對(duì)PA進(jìn)行誘導(dǎo)，測(cè)定環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和氧氟沙星四種喹諾酮類藥物誘導(dǎo)后PA的MIC值變化；測(cè)定對(duì)PA進(jìn)行二次誘導(dǎo)八代后其毒力因子表達(dá)和生物膜形成能力的影響，從而解釋喹諾酮類藥物對(duì)PA的PQS信號(hào)系統(tǒng)的影響。
　　方法：
　　篩選來自臨床的銅綠假單胞菌菌株18株，都經(jīng)過VITEK-2細(xì)菌鑒定儀重新鑒定；標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)AO1株和QS系統(tǒng)雙缺陷標(biāo)準(zhǔn)菌株P(guān)AOJP1株，共20株。（1）誘導(dǎo)前M

2、IC值的測(cè)定：采用瓊脂倍比稀釋法，多點(diǎn)接種儀測(cè)定菌株的MIC值，S、I、R判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)CLSI（2013版）；（2）用PA對(duì)四種喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和氧氟沙星的0.5倍MIC值一次誘導(dǎo)培養(yǎng)四代后，MIC值的測(cè)定：采用瓊脂倍比稀釋法，多點(diǎn)接種儀測(cè)定0.5倍MIC值一次誘導(dǎo)后菌株的MIC值，記錄其變化；（3）用上述四種喹諾酮類藥物對(duì)PA進(jìn)行0.5倍MIC二次誘導(dǎo)培養(yǎng)四代后，MIC值的測(cè)定：同（2）；（4）四種喹諾酮類藥

3、物對(duì)PA進(jìn)行二次誘導(dǎo)八代后其毒力因子的變化：包括彈性蛋白酶活性測(cè)定、綠膿菌素活性測(cè)定和鞭毛泳動(dòng)能力的測(cè)定；（5）四種喹諾酮類藥物對(duì)PA進(jìn)行二次誘導(dǎo)八代后其生物膜形成能力的變化：利用平板法制備生物膜、染色法建立生物膜，結(jié)合酶標(biāo)儀測(cè)定570nm波長(zhǎng)處的A來定量分析PA生物膜形成能力；（6）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，所有檢測(cè)結(jié)果的組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的兩相關(guān)樣本的秩和檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　?。?）誘導(dǎo)前

4、菌株的MIC值結(jié)果：環(huán)丙沙星的敏感率最高，為77.78％；左氧氟沙星的敏感率次之，為66.67%；氧氟沙星的敏感率為61.11%；莫西沙星雖無判斷標(biāo)準(zhǔn)，但是依據(jù)左氧氟沙星和氧氟沙星的折點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算出為38.89%。
　　（2）0.5倍MIC值一次誘導(dǎo)培養(yǎng)四代后菌株的MIC值變化：與誘導(dǎo)前相比，環(huán)丙沙星誘導(dǎo)后原來敏感的12株細(xì)菌的MIC值均有不同程度的升高，其中2株菌變化的最明顯，MIC值升高了8倍；左氧氟沙星誘導(dǎo)后原來敏感的12株

5、細(xì)菌的MIC值也均有不同程度的升高，其中1株菌的MIC值甚至升高了64倍；莫西沙星誘導(dǎo)后原來敏感的12株細(xì)菌的MIC值亦均有不同程度的升高，其中6株菌變化的最明顯，MIC值升高了8倍；氧氟沙星誘導(dǎo)后原來敏感的12株細(xì)菌的MIC值也均有不同程度的升高，其中6株菌的MIC值變化的最明顯，升高了8倍；原來對(duì)四種喹諾酮類藥物非敏感的6株菌中有相同的1株經(jīng)過誘導(dǎo)后MIC值升高。
　?。?）0.5倍MIC值二次誘導(dǎo)培養(yǎng)四代后菌株的MIC值變化

6、：與0.5倍MIC一次誘導(dǎo)培養(yǎng)四代后的結(jié)果相比，經(jīng)過環(huán)丙沙星二次誘導(dǎo)后原來MIC值升高的菌株其MIC仍升高，而原來MIC未變的菌株中有3株二次誘導(dǎo)后MIC值升高；經(jīng)過左氧氟沙星二次誘導(dǎo)后除1株菌對(duì)左氧氟沙星的MIC值未變外，原來MIC值升高的菌株的MIC值仍升高；經(jīng)過氧氟沙星和莫西沙星二次誘導(dǎo)后原來MIC值升高的菌株其MIC仍升高，而原來MIC未變的菌株誘導(dǎo)后MIC值仍未變。
　?。?）彈性蛋白酶活性測(cè)定：相較誘導(dǎo)前,環(huán)丙沙星誘導(dǎo)

7、后，18株細(xì)菌中16株的OD值升高，其中1株升高的最明顯，由誘導(dǎo)前的2.00升高到了3.10；左氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中13株的OD值升高，其中1株升高的最明顯，OD值由誘導(dǎo)前的1.60升高到了3.00；莫西沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中15株的OD值升高，其中2株升高的最明顯，OD值升高了1.00個(gè)單位；氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的OD值升高，其中2株升高的最明顯，OD值升高了0.80個(gè)單位；綠膿菌素活性測(cè)定：相較誘導(dǎo)前,環(huán)丙沙

8、星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中15株的OD值升高，其中1株升高的最明顯，由誘導(dǎo)前的0.11升高到了0.21；左氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的OD值升高，其中1株升高的最明顯，由誘導(dǎo)前的0.11升高到了0.29；莫西沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的OD值升高，其中3株升高的最明顯， OD值升高了0.15個(gè)單位；氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的OD值升高，其中5株升高的最明顯，OD值升高了0.08個(gè)單位；鞭毛泳動(dòng)能力：相較誘導(dǎo)前，環(huán)丙沙星

9、誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中17株的d值變大，其中1株升高的最明顯，直徑由誘導(dǎo)前的3.80cm升高到了5.70cm；左氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的d值變大，其中1株升高的最明顯，直徑由誘導(dǎo)前的3.80cm升高到了5.10cm；莫西沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中15株的d值變大，其中3株升高的最明顯，直徑均變大了1.40cm；氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中15株的d值變大，其中4株升高的最明顯，直徑均變大了1.00cm；前后比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。<

10、br>　?。?）生物膜形成能力測(cè)定：相較誘導(dǎo)前,環(huán)丙沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中16株的A570升高，其中1株升高的最明顯，由誘導(dǎo)前的0.72升高到了1.82；左氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的A570升高，其中1株升高的最明顯，由誘導(dǎo)前的0.72升高到了2.43；莫西沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中14株的A570升高，其中1株升高的最明顯，由誘導(dǎo)前的0.72升高到了1.82；氧氟沙星誘導(dǎo)后，18株細(xì)菌中13株的A570升高，其中1株升高的最

11、明顯，由誘導(dǎo)前的0.72升高到了1.82；前后比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1、用低于MIC值濃度的喹諾酮類藥物對(duì)PA分別進(jìn)行二次誘導(dǎo)各四代后，與誘導(dǎo)前相比：原先敏感菌株的MIC值均有了不同程度的升高，有的甚至發(fā)生耐藥；而原先非敏感的菌株，其MIC值卻幾乎無變化。
　　這提示：臨床上使用喹諾酮類藥物治療PA引起的感染時(shí)，切勿反復(fù)重復(fù)使用，否則會(huì)誘發(fā)耐藥菌的產(chǎn)生。
　　2、用喹諾酮類藥物誘導(dǎo)后，PA的毒力因子