銅綠假單胞菌耐喹諾酮類(lèi)藥物的分子機(jī)制研究.pdf

1、銅綠假單胞菌因其內(nèi)在特點(diǎn),對(duì)多種抗菌藥物表現(xiàn)出天然或獲得性耐藥.因此,銅綠假單胞菌耐藥株可作為研究細(xì)菌耐藥的分子機(jī)制,研究開(kāi)發(fā)抗耐藥細(xì)菌藥物的模型菌株.該研究首先從128株銅綠假單胞菌臨床分離株中,獲得大量對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥菌株;接著對(duì)耐藥株Ⅱ類(lèi)拓?fù)洚悩?gòu)酶基因突變與耐喹諾酮類(lèi)藥物的關(guān)系,MexAB-OprM主動(dòng)外排系統(tǒng)oprM結(jié)構(gòu)基因的表達(dá),mexR調(diào)節(jié)基因在MexAB-OprM外排系統(tǒng)中的作用以及gyrA基因突變與MexAB-OprM

2、主動(dòng)外排在細(xì)菌生物膜耐藥機(jī)制中的作用等進(jìn)行了較為深入的研究.128株銅綠假單胞菌臨床分離株對(duì)常用抗菌藥物的耐藥性研究表明:銅綠假單胞菌對(duì)頭孢曲松、諾氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率高達(dá)69.5﹪、57.8﹪和26.6﹪.其中,有17株對(duì)四種喹諾酮類(lèi)藥物呈交叉耐藥,占臨床分離株的13.3﹪;13株對(duì)實(shí)驗(yàn)所用的抗菌藥物表現(xiàn)出多重耐藥性,占臨床分離株的10.2﹪.可見(jiàn)銅綠假單胞菌臨床分離株耐藥的嚴(yán)重性.用微量棋盤(pán)稀釋法對(duì)喹諾酮與β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物聯(lián)合用

3、藥研究顯示,左氧氟沙星、環(huán)丙沙星與頭孢他啶、哌拉西林聯(lián)合用藥對(duì)大多數(shù)臨床分離銅綠假單胞菌具有協(xié)同或相加作用,其抗菌活性明顯增強(qiáng).因此,抗假單胞菌的β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物與喹諾酮類(lèi)藥物聯(lián)合用藥治療銅綠假單胞菌感染是切實(shí)可行的.對(duì)20株銅綠假單胞菌喹諾酮類(lèi)藥物耐藥株的gyrA基因PCR產(chǎn)物進(jìn)行RFLP分析表明,用PCR擴(kuò)增銅綠假單胞菌gyrA基因的喹諾酮耐藥決定區(qū),然后用SacⅡ酶切擴(kuò)增片段,可快速檢測(cè)gyrA基因第83位氨基酸密碼子發(fā)生點(diǎn)突變的

4、銅綠假單胞菌喹諾酮藥物耐藥株.用熒光法測(cè)定對(duì)環(huán)丙沙星不同敏感性的銅綠假單胞菌細(xì)胞內(nèi)環(huán)丙沙星蓄積量研究表明,多重耐藥株細(xì)胞內(nèi)環(huán)丙沙星穩(wěn)定態(tài)濃度顯著低于敏感株;加入能量抑制劑碳酰氰基-對(duì)-氯苯腙,所有菌株細(xì)胞內(nèi)環(huán)丙沙星蓄積量增加,但只有多重耐藥株細(xì)胞內(nèi)環(huán)丙沙星的濃度增加顯著,表明多重耐藥株具有主動(dòng)外排作用.MexAB-OprM主動(dòng)外排是導(dǎo)致野生型銅綠假單胞菌對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要因素.對(duì)MexAB-OprM外排系統(tǒng)的調(diào)節(jié)基因mexR的

5、研究結(jié)果顯示,銅綠假單胞菌主動(dòng)外排多重耐藥株P(guān)N1和PN16的mexR基因編碼第66位氨基酸的堿基發(fā)生了單點(diǎn)突變;將含有mexR突變基因的重組質(zhì)粒pMD18-T/ mexR轉(zhuǎn)化到了銅綠假單胞菌敏感菌PA2中,重組菌PA2獲得了對(duì)環(huán)丙沙星的部分耐藥性.用RT-PCR方法在重組菌PA2中擴(kuò)增出了oprM基因片段.這說(shuō)明MexAB-OprM主動(dòng)外排系統(tǒng),可能受mexR基因的調(diào)控.因此,我們有理由相信,mexR基因?qū)⒂锌赡艹蔀楹Y選抑制主動(dòng)外排耐