單側學習形成雙側記憶的神經(jīng)元電生理研究.pdf

1、目的：研究經(jīng)單側學習形成雙側記憶的C57BL-6-gfp小鼠，其barrel區(qū)錐體神經(jīng)元和GABA能抑制性神經(jīng)元內在特性及突觸傳遞效率的變化。
　　方法：
　　1.造模：選取出生10天的C57BL-6-gfp小鼠（以下簡稱小鼠），同時給予5Hz右側胡須刺激和乙酸丁酯嗅覺刺激，兩小時一次，每天5次，連續(xù)訓練10天。
　　2.行為學實驗：實驗分為兩組，分別為空白對照組及聯(lián)合訓練組(WS+OS)。行為學實驗包括T迷宮實驗及胡

2、須頻率實驗。T迷宮實驗：將聯(lián)合訓練組小鼠及空白對照組小鼠分別進行T迷宮實驗，即給予5Hz觸覺刺激后小鼠立即進入T迷宮，對小鼠回避一側乙酸丁酯的方向性進行記錄。胡須頻率實驗，聯(lián)合訓練組和空白對照組小鼠造模期間，每天給予嗅覺刺激后立即拍攝視頻，應用分析軟件對兩組小鼠雙側胡須頻率分別統(tǒng)計記錄。
　　3.電生理實驗：將經(jīng)檢測造模成功后的聯(lián)合訓練組小鼠及空白對照組小鼠進行電生理實驗。電生理實驗具體流程為：小鼠異氟烷吸入麻醉后，迅速斷頭取腦，

3、用切片機做冠狀切片，每片400μm；將切好后的腦片置于已配好的氧合人工腦脊液（ASCF）中（溫度為25℃，提前配好）孵育45-60分鐘；孵育完成后將其轉移至灌流槽，30℃對腦片進行灌流；應用光學顯微鏡及熒光顯微鏡定位小鼠雙側barrel區(qū)谷氨酸能神經(jīng)元及GABA能神經(jīng)元；使用Axonclamp-200B放大器及數(shù)模轉換器，全細胞模式下記錄電流鉗指標及電壓鉗指標，研究小鼠雙側barrel區(qū)錐體神經(jīng)元及GABA能神經(jīng)元胞體功能變化及突觸傳遞

4、效率的變化，使用Clamp10.1進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。
　　結果：
　　1.行為學實驗結果：
　　1) T迷宮實驗結果：聯(lián)合訓練組小鼠回避乙酸丁酯的概率高于空白對照組小鼠；
　　2)胡須頻率實驗結果：聯(lián)合訓練組小鼠左右側胡須頻率均高于空白對照組小鼠，且刺激側胡須頻率高于未刺激側側胡須頻率。
　　2.電生理實驗結果：
　　a)電流鉗實驗結果：
　　1）錐體神經(jīng)元：與空白對照組相比，聯(lián)合訓練組雙側胡須

5、對應barrel區(qū)的能障降低、動作電位間距縮小、絕對不應期縮短、單位時間內動作電位發(fā)放個數(shù)增加；且刺激側胡須對應barrel區(qū)與對側胡須barrel區(qū)相比，能障降低、動作電位間距縮小、絕對不應期縮短、單位時間內動作電位發(fā)放個數(shù)增加。
　　2）GABA能神經(jīng)元：與空白對照組相比，聯(lián)合訓練組雙側胡須對應barrel區(qū)的能障升高、動作電位間距增加、絕對不應期延長、單位時間內動作電位發(fā)放個數(shù)減少；且刺激側胡須對應barrel區(qū)與對側胡須b

6、arrel區(qū)相比，能障升高、動作電位間距增加、絕對不應期延長、單位時間內動作電位發(fā)放個數(shù)減少。
　　b)電壓鉗實驗結果：
　　1）錐體神經(jīng)元：與空白對照組相比，聯(lián)合訓練組雙側胡須對應barrel區(qū)的sEPSC（自發(fā)性興奮性突觸后電流）的間距縮短、幅度增加；且刺激側胡須對應barrel區(qū)與對側胡須barrel區(qū)相比，sEPSC的間距變化不大、幅度增加。與空白對照組相比，聯(lián)合訓練組雙側胡須對應barrel區(qū)的sIPSC（自發(fā)性抑

7、制性突觸后電流）的間距增大、幅度減?。磺掖碳群殞猙arrel區(qū)與對側胡須barrel區(qū)相比， sIPSC的間距變化不大、幅度減小。
　　2）GABA能神經(jīng)元：與空白對照比相比，聯(lián)合訓練組雙側胡須對應barrel區(qū)的sEPSC的間距增大、幅度減?。磺掖碳群殞猙arrel區(qū)與對側胡須barrel區(qū)相比，sEPSC的間距變化不大、幅度減小。
　　結論：
　　1.單側學習后記憶可在雙側儲存；且此種儲存方式為不對稱儲