單側(cè)學(xué)習(xí)形成雙側(cè)記憶的神經(jīng)元電生理研究.pdf

1、目的：研究經(jīng)單側(cè)學(xué)習(xí)形成雙側(cè)記憶的C57BL-6-gfp小鼠，其barrel區(qū)錐體神經(jīng)元和GABA能抑制性神經(jīng)元內(nèi)在特性及突觸傳遞效率的變化。
　　方法：
　　1.造模：選取出生10天的C57BL-6-gfp小鼠（以下簡(jiǎn)稱小鼠），同時(shí)給予5Hz右側(cè)胡須刺激和乙酸丁酯嗅覺(jué)刺激，兩小時(shí)一次，每天5次，連續(xù)訓(xùn)練10天。
　　2.行為學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)分為兩組，分別為空白對(duì)照組及聯(lián)合訓(xùn)練組(WS+OS)。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)包括T迷宮實(shí)驗(yàn)及胡

2、須頻率實(shí)驗(yàn)。T迷宮實(shí)驗(yàn)：將聯(lián)合訓(xùn)練組小鼠及空白對(duì)照組小鼠分別進(jìn)行T迷宮實(shí)驗(yàn)，即給予5Hz觸覺(jué)刺激后小鼠立即進(jìn)入T迷宮，對(duì)小鼠回避一側(cè)乙酸丁酯的方向性進(jìn)行記錄。胡須頻率實(shí)驗(yàn)，聯(lián)合訓(xùn)練組和空白對(duì)照組小鼠造模期間，每天給予嗅覺(jué)刺激后立即拍攝視頻，應(yīng)用分析軟件對(duì)兩組小鼠雙側(cè)胡須頻率分別統(tǒng)計(jì)記錄。
　　3.電生理實(shí)驗(yàn)：將經(jīng)檢測(cè)造模成功后的聯(lián)合訓(xùn)練組小鼠及空白對(duì)照組小鼠進(jìn)行電生理實(shí)驗(yàn)。電生理實(shí)驗(yàn)具體流程為：小鼠異氟烷吸入麻醉后，迅速斷頭取腦，

3、用切片機(jī)做冠狀切片，每片400μm；將切好后的腦片置于已配好的氧合人工腦脊液（ASCF）中（溫度為25℃，提前配好）孵育45-60分鐘；孵育完成后將其轉(zhuǎn)移至灌流槽，30℃對(duì)腦片進(jìn)行灌流；應(yīng)用光學(xué)顯微鏡及熒光顯微鏡定位小鼠雙側(cè)barrel區(qū)谷氨酸能神經(jīng)元及GABA能神經(jīng)元；使用Axonclamp-200B放大器及數(shù)模轉(zhuǎn)換器，全細(xì)胞模式下記錄電流鉗指標(biāo)及電壓鉗指標(biāo)，研究小鼠雙側(cè)barrel區(qū)錐體神經(jīng)元及GABA能神經(jīng)元胞體功能變化及突觸傳遞

4、效率的變化，使用Clamp10.1進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1) T迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果：聯(lián)合訓(xùn)練組小鼠回避乙酸丁酯的概率高于空白對(duì)照組小鼠；
　　2)胡須頻率實(shí)驗(yàn)結(jié)果：聯(lián)合訓(xùn)練組小鼠左右側(cè)胡須頻率均高于空白對(duì)照組小鼠，且刺激側(cè)胡須頻率高于未刺激側(cè)側(cè)胡須頻率。
　　2.電生理實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　a)電流鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1）錐體神經(jīng)元：與空白對(duì)照組相比，聯(lián)合訓(xùn)練組雙側(cè)胡須

5、對(duì)應(yīng)barrel區(qū)的能障降低、動(dòng)作電位間距縮小、絕對(duì)不應(yīng)期縮短、單位時(shí)間內(nèi)動(dòng)作電位發(fā)放個(gè)數(shù)增加；且刺激側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)與對(duì)側(cè)胡須barrel區(qū)相比，能障降低、動(dòng)作電位間距縮小、絕對(duì)不應(yīng)期縮短、單位時(shí)間內(nèi)動(dòng)作電位發(fā)放個(gè)數(shù)增加。
　　2）GABA能神經(jīng)元：與空白對(duì)照組相比，聯(lián)合訓(xùn)練組雙側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)的能障升高、動(dòng)作電位間距增加、絕對(duì)不應(yīng)期延長(zhǎng)、單位時(shí)間內(nèi)動(dòng)作電位發(fā)放個(gè)數(shù)減少；且刺激側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)與對(duì)側(cè)胡須b

6、arrel區(qū)相比，能障升高、動(dòng)作電位間距增加、絕對(duì)不應(yīng)期延長(zhǎng)、單位時(shí)間內(nèi)動(dòng)作電位發(fā)放個(gè)數(shù)減少。
　　b)電壓鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1）錐體神經(jīng)元：與空白對(duì)照組相比，聯(lián)合訓(xùn)練組雙側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)的sEPSC（自發(fā)性興奮性突觸后電流）的間距縮短、幅度增加；且刺激側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)與對(duì)側(cè)胡須barrel區(qū)相比，sEPSC的間距變化不大、幅度增加。與空白對(duì)照組相比，聯(lián)合訓(xùn)練組雙側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)的sIPSC（自發(fā)性抑

7、制性突觸后電流）的間距增大、幅度減??；且刺激側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)與對(duì)側(cè)胡須barrel區(qū)相比， sIPSC的間距變化不大、幅度減小。
　　2）GABA能神經(jīng)元：與空白對(duì)照比相比，聯(lián)合訓(xùn)練組雙側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)的sEPSC的間距增大、幅度減??；且刺激側(cè)胡須對(duì)應(yīng)barrel區(qū)與對(duì)側(cè)胡須barrel區(qū)相比，sEPSC的間距變化不大、幅度減小。
　　結(jié)論：
　　1.單側(cè)學(xué)習(xí)后記憶可在雙側(cè)儲(chǔ)存；且此種儲(chǔ)存方式為不對(duì)稱儲(chǔ)