腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子及其受體在多囊卵巢綜合征大鼠中的表達(dá)研究.pdf

1、【目的】多囊卵巢綜合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)是青春期及育齡女性中最常見的高度異質(zhì)性的內(nèi)分泌與代謝紊亂疾病，表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)和不孕、雄激素過多癥狀、肥胖和胰島素抵抗，可引起2型糖尿病、心血管疾病、子宮內(nèi)膜癌等遠(yuǎn)期并發(fā)癥。主要發(fā)病機(jī)制為由異常的內(nèi)分泌及旁分泌因子、代謝障礙及卵泡內(nèi)微環(huán)境的改變共同作用導(dǎo)致的卵泡發(fā)育障礙。近年來發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic

2、 factor, BDNF)作為正常卵泡發(fā)育的生理調(diào)節(jié)劑，在卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育等過程中起著重要作用。本研究通過構(gòu)建 PCOS大鼠模型，探討B(tài)DNF及受體酪氨酸激酶受體B(tyrosine receptor kinaseB,TrkB)在PCOS大鼠卵巢中的表達(dá)情況，從分子水平揭示BDNF-TrkB對(duì)PCOS患者卵泡發(fā)育障礙可能的病理生理機(jī)制。
　　【方法】應(yīng)用來曲唑誘導(dǎo)大鼠 PCOS模型，模型組大鼠20只灌胃服用來

3、曲唑1mg·kg－1·d－1（溶于1％羧甲基纖維素中），對(duì)照組灌胃服用1%羧甲基纖維素，兩組均連續(xù)灌服21d。灌胃期間每日定時(shí)做大鼠陰道涂片加吉姆薩染色以監(jiān)測(cè)兩組大鼠的動(dòng)情周期有無改變。造模后應(yīng)用放射免疫法測(cè)定血清 FSH、LH、E2、P、T水平，HE染色法觀察卵巢組織學(xué)變化，Real-time PCR法檢測(cè)模型組與對(duì)照組大鼠卵巢組織中BDNF及TrkB基因的表達(dá)，Western blot法檢測(cè)兩組大鼠卵巢組織中BDNF及TrkB蛋白的

4、表達(dá)水平差異，免疫組織化學(xué)法檢測(cè) TrkB在兩組大鼠卵巢組織中的定位表達(dá)及其在不同級(jí)別卵泡中的表達(dá)差異。采用SAS9.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，結(jié)果采用x±s進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，組間比較均采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　【結(jié)果】模型組大鼠在應(yīng)用來曲唑后80%大鼠動(dòng)情周期失去規(guī)律性變化。與對(duì)照組比較，模型組血清T、LH、FSH濃度顯著增高，E2、P濃度顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

5、。模型組卵巢體積增大，囊狀擴(kuò)張卵泡明顯增多，黃體數(shù)量明顯減少。模型組卵巢組織中BDNFmRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而TrkB mRNA顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。BDNF蛋白在 PCOS模型組卵巢組織中的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，F(xiàn)l-TrkB在模型組的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而tr-TrkB在模型組的表達(dá)明顯低于對(duì)照組，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。TrkB在兩組卵巢的顆粒細(xì)胞和卵母細(xì)胞上的表達(dá)量不同，其中TrkB在模

6、型組大竇前卵泡的顆粒細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組，在卵母細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度明顯低于對(duì)照組，TrkB在模型組囊狀卵泡的顆粒細(xì)胞中的表達(dá)強(qiáng)度遠(yuǎn)高于對(duì)照組竇狀卵泡顆粒細(xì)胞的表達(dá)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TrkB在各級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞上的表達(dá)未見明顯差異，而在卵母細(xì)胞上的表達(dá)呈遞減趨勢(shì)，即在原始卵泡卵母細(xì)胞上表達(dá)最強(qiáng)，然后隨著卵泡發(fā)育 TrkB在卵母細(xì)胞上的表達(dá)逐漸減弱。
　　【結(jié)論】來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型是研究PCOS病理生