阿曼托雙黃酮的輻射防護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究阿曼托雙黃酮（AMF）的輻射防護(hù)作用機(jī)制
　　方法：
　　1.對(duì)C57BL/6小鼠采取預(yù)防給藥，照射前腹腔注射AMF,用60Coγ射線進(jìn)行一次性全身照射。C57BL/6小鼠經(jīng)7.5 Gy劑量照射后，觀察C57BL/6小鼠的存活率，觀察時(shí)間為30 d；用Tunel和DAPI染色檢測(cè) AMF對(duì)照射后C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞凋亡的影響；用PI染色和細(xì)胞流式檢測(cè) AMF對(duì)照射后C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞周期的

2、影響；Western Blot法檢測(cè)AMF對(duì)照射后C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞中Tnfaip2蛋白表達(dá)的影響；C57BL/6小鼠經(jīng)3Gy劑量照射后，采用細(xì)胞集落培養(yǎng)檢測(cè)AMF對(duì)照射后骨髓細(xì)胞增殖能力的影響；用CD34、CD117流式抗體雙標(biāo)和細(xì)胞流式檢測(cè)AMF對(duì)照射后小鼠造血干細(xì)胞數(shù)目的影響。
　　2.培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓原代細(xì)胞，或者用MACS法分選，培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓CD117+細(xì)胞，照射前12h采取預(yù)防給藥，然后

3、接受12Gy60Coγ射線一次性照射；在照后6h、12h，分別用Hoechst染色法檢測(cè)AMF對(duì)照射后骨髓原代細(xì)胞凋亡的影響；用Tunel和DAPI染色檢測(cè)AMF對(duì)照射后CD117+細(xì)胞凋亡的影響；用PI染色和細(xì)胞流式檢測(cè)對(duì)AMF對(duì)照射后兩種細(xì)胞周期的影響；用Elisa法檢測(cè)對(duì)AMF對(duì)照射后兩種細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α濃度的影響；RT-PCR檢測(cè)對(duì)Tnfaip2表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.AMF可以提高7.5 Gy致死

4、劑量照射后C57BL/6小鼠30％的存活率，且延長(zhǎng)了小鼠的存活時(shí)間；AMF可以降低輻射后細(xì)胞的凋亡，對(duì)輻射后細(xì)胞的增值能力的恢復(fù)也有所幫助，但對(duì)造血干細(xì)胞的數(shù)目未表現(xiàn)出顯著的保護(hù)作用；
　　2.AMF能夠緩解輻射后C57BL/6小鼠骨髓原代細(xì)胞和C57BL/6小鼠骨髓CD117+細(xì)胞的凋亡；降低兩種細(xì)胞培養(yǎng)基中TNF-α的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　AMF具有一定的抗輻射作用，它可能是通過(guò)抑制輻射后TNF-α的表達(dá)、調(diào)節(jié)輻