固定化黑根霉進行甾體C11α羥基化的研究.pdf

1、甾體藥物在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用十分廣泛,在甾體11位C上引入羥基是生產(chǎn)甾體藥物中的關(guān)鍵步驟。黑根霉具有極強的甾體C11α羥基化能力,微生物進行C11α羥基化可以省去化學(xué)合成法的14步反應(yīng)。
　　 聚氨酯泡沫具有成本低,密度低,物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,孔隙率大等優(yōu)點,可以作為很好的細(xì)胞固定化的載體。
　　 本文利用吸附法用聚氨酯泡沫對黑根霉進行固定。采用了五種聚氨酯泡沫,固定化效果最好的泡沫每立方厘米可以吸附14.25×106個黑根霉

2、孢子,在60分鐘左右即可達(dá)到最大吸附量。用聚乙烯亞胺和聚丙烯酰胺處理聚氨酯泡沫可以明顯提高聚氨酯泡沫的吸附密度。
　　 用固定化好的孢子先培養(yǎng)成菌絲,然后在搖瓶進行甾體C11α羥基化轉(zhuǎn)化研究。固定化細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率高于游離細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率;沃氏氧化物對菌體生長有明顯的抑制作用;對轉(zhuǎn)化的條件進行優(yōu)化,得到的結(jié)果為:固定化材料加入量3.5g/L,發(fā)酵20h后投加底物,轉(zhuǎn)化48h,轉(zhuǎn)速200r/min,pH4.5,底物轉(zhuǎn)化率42％。固定化后的

3、菌體重復(fù)利用一次后保留46%的活性,重復(fù)利用兩次后保留13%的活性:在4℃條件下保存3周后仍有34.8%的活性。
　　 用固定化細(xì)胞在靜息細(xì)胞條件下進行C11α羥基化的研究。在靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中加入玉米漿粉可以明顯提高靜息細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率,說明轉(zhuǎn)化中細(xì)胞需要碳源提供能量,與文獻報道中C11α羥基化反應(yīng)機理相符。加入0.05mol/l丙酮作為助溶劑可提高甾體C11α羥基化的能力,加入0.077g/1的硫酸鎂和氯化錳可提高菌體的轉(zhuǎn)化率,