黑鰻藤中C-,21-甾體苷類成分及其免疫活性研究.pdf

1、C21甾體苷是一類廣泛存在于蘿藦科植物中的重要活性物質(zhì)，具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲、調(diào)節(jié)免疫功能、抗生育、抗癲癇、抑制乙酰膽堿酯酶活性等廣泛藥理作用。因此C21甾體苷的分離、結(jié)構(gòu)鑒定及其藥理作用研究日益引起各國(guó)學(xué)者的興趣。黑鰻藤Stephanotismucronata(Blanco)Merr.系蘿藦科黑鰻藤屬植物，為中國(guó)南部地區(qū)民間草藥，具有強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)疼痛。為了闡明黑鰻藤治療這些疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，以

2、及從中篩選尋找免疫抑制活性成分，本課題對(duì)黑鰻藤根中總甾體苷進(jìn)行了分離，得到10個(gè)新的C21甾體苷類化合物，命名為黑鰻藤新苷A-G(6-12)和K-M(13-15)。以MTT法測(cè)定這10個(gè)化合物體外對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響，并對(duì)體外免疫抑制作用顯著、含量最高的黑鰻藤新苷K進(jìn)一步進(jìn)行了小鼠體內(nèi)免疫抑制活性評(píng)價(jià)、對(duì)小鼠血清凝集素的影響試驗(yàn)以及大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的防治作用研究。 黑鰻藤根乙醇提取物的氯仿可溶部分經(jīng)硅膠柱層析、RP-1

3、8柱層析、SephadexLH-20柱層析和HPLC分離純化得到10個(gè)新的C21甾體苷類化合物。經(jīng)化學(xué)降解和包括ESI-MS、HRESI-MS、1HNMR、13CNMR、1H-1HCOSY、DEPT、HMQC及HMBC等多種光譜技術(shù)分析測(cè)定，它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)分別確定為12-O-去乙?；}藦苷元3-O-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷A，6)，12-

4、O-去乙酰基蘿藦苷元3-O-β-D-黃花夾竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷B，7)，蘿藦苷元3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→4)-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷C，8)，20-O-惕各?；馍汉鬈赵?-O-β-D-黃花夾竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β

5、-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷D，9)，20-O-惕各?；?5,6-二氫肉珊瑚苷元3-O-β-D-黃花夾竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷1(黑鰻藤新苷E，10)，羅他明3-O-β-D-黃花夾竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷F，11)，12-O-乙?；?20-O-惕各?；馍汉鬈赵?-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→4)-6-去氧-

6、3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷G，12)，12-O-乙?；?20-O-(N-甲基)鄰氨基苯甲?；馍汉鬈赵?-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→4)-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷K，13)，12-O-乙?；?20-O-(N-甲基)鄰氨基苯甲?；?5,6-二氫肉珊

7、瑚苷元3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→4)-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷L，14)，12-O-煙?；?20-O-肉桂?；馍汉鬈赵?-O-β-D-葡萄吡喃糖基-(1→4)-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷M，15)。 體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)

8、果表明：黑鰻藤新苷A、B、C和F能顯著地促進(jìn)刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)。從濃度-效應(yīng)關(guān)系看，調(diào)節(jié)作用呈明顯的雙向性。而黑鰻藤新苷D、E、G、K、L和M可顯著地抑制ConA和LPS誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，且呈濃度依賴性關(guān)系。黑鰻藤新苷K對(duì)卵清蛋白(OVA)受免小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答反應(yīng)影響結(jié)果顯示，其不僅能顯著或極顯著地抑制ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞和OVA誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，而