芯片篩分電泳中負(fù)壓進(jìn)樣和富集技術(shù)的研究.pdf

1、芯片毛細(xì)管電泳具有多種分離模式并可與多種化學(xué)操作相結(jié)合，已作為主要的分離單元廣泛應(yīng)用于微全分析系統(tǒng)中。近來(lái)，負(fù)壓進(jìn)樣方法因其快速和無(wú)歧視的進(jìn)樣已應(yīng)用于區(qū)帶芯片毛細(xì)管電泳。本文首次提出了負(fù)壓進(jìn)樣方法在芯片凝膠體系的應(yīng)用，并進(jìn)一步通過(guò)在線富集技術(shù)提高了測(cè)定的性能。
　　 第一章綜述了芯片毛細(xì)管電泳的壓力進(jìn)樣方法和在線樣品富集技術(shù)，其中包括正壓力進(jìn)樣、負(fù)壓力進(jìn)樣及聚焦富集、電泳富集及靜態(tài)富集。
　　 在第二章中，我們提出了一種

2、負(fù)壓結(jié)合電動(dòng)力在芯片篩分毛細(xì)管電泳內(nèi)的快速、可變體積的樣品引入方法。該方法進(jìn)樣設(shè)備簡(jiǎn)單，只需低成本的微型真空泵和單路電源。為了降低進(jìn)樣通道的水動(dòng)阻力，篩分介質(zhì)只充滿(mǎn)緩沖溶液槽到十字交叉點(diǎn)之間的分離通道。注入的樣品帶長(zhǎng)度與進(jìn)樣時(shí)間成比例，只需簡(jiǎn)單的改變進(jìn)樣時(shí)間就能自由選擇樣品帶體積，每次進(jìn)樣1s的樣品消耗僅為1.7×102nL,只需0.024s就能無(wú)歧視的將被分析物輸送到進(jìn)樣口，并能在分離通道中注入形狀良好的高質(zhì)量的樣品區(qū)帶。該體系在芯片

3、篩分電泳中具有巨大的應(yīng)用潛力，能實(shí)現(xiàn)高的分析通量、重現(xiàn)性、靈敏度和分離性能。
　　 在第三章中，我們將負(fù)壓進(jìn)樣技術(shù)應(yīng)用于等速電泳富集并與凝膠電泳分離聯(lián)用(ITP-GE)。ITP-GE包括三個(gè)步驟：樣品引入、等速電泳富集和凝膠電泳分離。在小于1s的時(shí)間內(nèi)，即可形成前導(dǎo)電解質(zhì)、樣品、后導(dǎo)電解質(zhì)的三明治夾心結(jié)構(gòu)。所提出的方法用DNA片段做為模型分析物進(jìn)行評(píng)估。與傳統(tǒng)的采用夾流進(jìn)樣的十字芯片凝膠電泳相比，平均的信號(hào)增強(qiáng)為185倍。結(jié)果表

4、明ITP-GE方法具有靈敏度高、進(jìn)樣速度快、重現(xiàn)性好和設(shè)備簡(jiǎn)單等優(yōu)越性。
　　 第四章提出了可變體積負(fù)壓進(jìn)樣技術(shù)在蛋白質(zhì)場(chǎng)增強(qiáng)堆積進(jìn)樣-等速電泳-凝膠分離(FASI-ITP-GE)上的應(yīng)用。前導(dǎo)電解質(zhì)、樣品、后導(dǎo)電解質(zhì)三明治區(qū)帶在進(jìn)樣步驟中形成，且樣品帶的長(zhǎng)度與進(jìn)樣時(shí)間按成正比。與場(chǎng)增強(qiáng)樣品進(jìn)樣連用，引入到等速電泳通道的為堆積后的樣品，因此不會(huì)占用等速電泳通道的長(zhǎng)度。與十字芯片凝膠電泳相比，使用FASI-ITP-GE，實(shí)現(xiàn)了超過(guò)