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文檔簡介
1、在pH7.0條件下利用膜分離組件處理腈水解酶粗品，并添加0.5％蔗糖作為凍干保護(hù)劑凍干，得到純化的腈水解酶，其酶活為69U。結(jié)合葡聚糖凝膠層析和SDS-PAGE電泳可知純化的腈水解酶是分子量為21190Da的寡酶，該酶催化R,S-扁桃腈的最佳條件是：pH9.6，酶與底物的質(zhì)量比為7:10，溫度40℃，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)甲苯-水組成的兩相反應(yīng)大大提高了酶的催化效率，且甲苯與水最佳體積比為1:10。添加選擇性吸附R-扁桃酸的717樹脂有利于轉(zhuǎn)移生成的
2、R-扁桃酸，導(dǎo)致轉(zhuǎn)化率的提高。
以D155樹脂為基體，通過二環(huán)己基碳二亞胺與賴氨酸縮合，制備出L-D155樹脂，再以L-D155樹脂為載體，通過戊二醛分別與載體和腈水解酶形成席夫堿制備固定化腈水解酶。固定化酶紅外分析表明D155樹脂成功地通過酰胺鍵接枝了賴氨酸，N-L-D155在1671cm-1處出現(xiàn)的寬峰也證明腈水解酶通過席夫堿反應(yīng)被成功固定在L-D155上。
腈水解酶的最佳固定化條件為：戊二醛、載體游離氨基與腈水
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