N-氨甲酰水解酶的分離純化及固定化的初步研究.pdf

1、本論文對N-氨甲?；?D-氨基酸酰胺水解酶進行了初步研究,主要包括以下幾個方面:1)N-氨甲酰基-D-氨基酸酰胺水解酶進行了分離純化;2)對其性質(zhì)進行了研究;3)對N-氨甲?；?D-氨基酸酰胺水解酶固定化的條件進行了優(yōu)化并對固定化酶的性質(zhì)進行了初步探討.N-甲酰氨基酸酰胺水解酶(NCase)被純化了15.74倍,收率為0.75﹪,純化的收率和倍數(shù)較低,這可能因為Burkholderia cepecia Njut01中的NCase的含量不

2、是很高,并且NCase容易氧化失活,造成較低的收率.SDS/PAGE該酶的亞基分子量是35KDa.酶學性質(zhì)研究表明,(1)Burkholderia cepecia Njut01 N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶是嚴格的D-N-氨甲酰氨基酸酰胺水解酶,其初速度受底物濃度的影響,高濃度底物抑制NCase的酶活.(2)測定了基本動力學常數(shù):當N-phe為底物時米氏常數(shù)K<,m>=10.22mmol·L<'-1>,最大反應(yīng)初速度r<,m>=0.

3、27mmol·L<'-1>·min<'-1>,最適的底物濃度約1.2mg·mL<'-1>.(3)Burkholderia cepecia Njut01 N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶的最適pH為7.2,最適溫度為52℃.(4)Burkholderia cepecia Njut01 N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶在空氣中極易失活,解決NCase的失活問題將對利用NCase進行D-氨基酸生產(chǎn)有重要意義.(5)研究了金屬離子對NCase的

4、影響.EDTA在20mmol·L<'-1>時對NCase沒有影響,表明N-氨甲酰氨基酸酰胺水解酶不屬于金屬酶.一價堿金屬K<'+>、Na<'+>、Li<'+>和二價的堿土金屬Ca<'2+>、Mg<'2+>、Ba<'2+>對酶有激活作用,重金屬Cu<'2+>、Hg<'2+>對酶有強烈的抑制作用.過渡金屬中除Mn<'2+>有激活作用外,Zn<'2+>、Co<'2+>、Ni<'2+>、Fe<'2+>都對酶有抑制作用.(6)由巰基試劑對Burk