克氏原螯蝦無(wú)脊椎動(dòng)物型溶菌酶的分子克隆與功能分析.pdf

1、無(wú)脊椎動(dòng)物主要依靠先天免疫系統(tǒng)來(lái)抵御病原的入侵。研究無(wú)脊椎動(dòng)物先天免疫，特別是經(jīng)濟(jì)無(wú)脊椎動(dòng)物的先天免疫，不僅可以豐富無(wú)脊椎動(dòng)物免疫學(xué)的內(nèi)容，對(duì)經(jīng)濟(jì)無(wú)脊椎動(dòng)物養(yǎng)殖中的疾病防治也具有重要實(shí)際的意義?？耸显r(俗稱(chēng)小龍蝦)(Procambarus clarkii)是一種重要的淡水經(jīng)濟(jì)甲殼類(lèi)，在一些地區(qū)已形成規(guī)?；B(yǎng)殖，在高溫季節(jié)容易發(fā)生多種疾病，因此養(yǎng)殖中的疾病防治越來(lái)越引起人們的重視。另外克氏原螯蝦也是一種比較好的研究甲殼綱動(dòng)物先天免疫的

2、模型，材料易得，養(yǎng)殖條件要求簡(jiǎn)單，所得研究結(jié)果也很容易應(yīng)用到對(duì)蝦養(yǎng)殖中。因此我們選擇小龍蝦進(jìn)行了先天免疫研究。我們?cè)谛↓埼r中得到了很多免疫相關(guān)基因，本論文主要對(duì)溶菌酶進(jìn)行較系統(tǒng)的研究。
　　 溶菌酶是一種重要的免疫效應(yīng)分子，廣泛分布于多種物種中。溶菌酶有多種類(lèi)型，而無(wú)脊椎動(dòng)物型(invertebrate type，簡(jiǎn)稱(chēng)ⅰ型)溶菌酶是最近才被確定為溶菌酶家族中的一員。以前的研究表明ⅰ型可能具有胞壁酸酶活性、異肽鍵酶活性和不依賴(lài)于酶

3、活性的抗菌作用。在本研究中，我們從克氏原螯蝦中克隆得到了兩個(gè)ⅰ型溶菌酶基因的cDNAs，命名為Pclysi1和Pclysi2。序列比對(duì)的結(jié)果顯示Pctysi1中與胞壁酸酶活性相關(guān)的位點(diǎn)和與異肽鍵酶活性相關(guān)的位點(diǎn)都是缺失的，而Pclysi2中缺失了胞壁酸酶的活性位點(diǎn)，但是具有異肽鍵酶的活性位點(diǎn)。半定量RT-PCR和實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果顯示這兩個(gè)基因具有類(lèi)似的組織分布模式，并且兩個(gè)基因都在細(xì)菌刺激后產(chǎn)生表達(dá)量的上調(diào)，表明這兩個(gè)基因可能參與先