α7nAChR和nNOS在Aβ誘導(dǎo)的認(rèn)知障礙大鼠中樞表達(dá)的變化及其對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能的影響.pdf

1、目的：
　　本文旨在探討煙堿型乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptor, nAChR）與神經(jīng)元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthetase, nNOS）在Aβ誘導(dǎo)的認(rèn)知障礙大鼠皮質(zhì)和海馬的時(shí)間和空間分布與變化及其對(duì)學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知功能的影響。觀察Aβ誘導(dǎo)的認(rèn)知障礙模型大鼠在持續(xù)不同的時(shí)間內(nèi)皮質(zhì)及海馬各區(qū)α7nAChR和nNOS水平和分布的變化，分析其在認(rèn)知障礙模

2、型大鼠中樞分布的空間特征及其隨時(shí)間變化的規(guī)律；以及在復(fù)制模型的同時(shí)側(cè)腦室反復(fù)多次應(yīng)用NO前體左旋精氨酸（L-arginine, L-Arg）或α7nAChR激動(dòng)劑氯化膽堿（choline chloride, CC）和聯(lián)合應(yīng)用L-Arg和CC對(duì)認(rèn)知功能障礙模型大鼠皮質(zhì)和海馬nNOS和α7nAChR水平和學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知功能的影響，探討中樞NO能系統(tǒng)與煙堿系統(tǒng)在大鼠認(rèn)知功能障礙的相互作用。
　　方法：
　　第一部分：SD大鼠60只，

3、隨機(jī)分成6組，其中3個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別經(jīng)側(cè)腦室注射凝聚態(tài)Aβ1-42（2.5μg/μl，4μl），連續(xù)觀察7d（7 d Aβ組）、14 d（14 d Aβ組）和21 d（21 d Aβ組）；3個(gè)對(duì)照組（分別為7 d NS組、14 d NS組和21 d NS組）則注射等量生理鹽水和觀察相同的時(shí)間。用Y迷宮刺激器對(duì)大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)和記憶行為能力檢測(cè)。用免疫組織化學(xué)染色和Western-blot檢測(cè)皮質(zhì)和海馬CA1、CA3、DG各區(qū)nNOS和α7nAC

4、hR陽(yáng)性細(xì)胞分布和蛋白表達(dá)量的變化。第二部分：40只SD大鼠隨機(jī)分成4組，每組經(jīng)側(cè)腦室注射Aβ1-42(2.5μg/μl，4μl），30 min后分別再注射：NO前體L-Arg（17.5μg/μl）（Aβ+L-Arg組）、或α7nAChR激動(dòng)劑CC（8μg/μl）（Aβ+CC組）、或等量的L-Arg和CC（Aβ+L-Arg+CC組）、以及生理鹽水（Aβ+NS組），每天各一次，每次5μl，連續(xù)7天。各組于最后一次給藥30 min后進(jìn)行行為

5、學(xué)檢測(cè)、免疫組織化學(xué)染色和Western-blot檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　(1)第一部分結(jié)果：1)Y迷宮行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，各組大鼠在連續(xù)4天的檢測(cè)中其學(xué)習(xí)和記憶達(dá)標(biāo)次數(shù)均隨測(cè)試天數(shù)的增加而減少。大鼠學(xué)習(xí)和記憶達(dá)標(biāo)次數(shù)，在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與各自對(duì)照組比較均增多（均為P<0.01）；在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間比較，14 d組較7 d組增多（均為P<0.05），21 d組較14 d組增多（P<0.05或 P<0.01）；而在3個(gè)對(duì)照組之間比較均

6、沒有明顯差異。2)免疫組化和Western-blot檢測(cè) nNOS和α7nAChR在皮質(zhì)和海馬各區(qū)表達(dá)的積分光密度值和蛋白表達(dá)量，在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與各自對(duì)照組比較均降低（P<0.05或 P<0.01），特別是前額葉皮質(zhì)淺層和海馬CA3區(qū)變化明顯；在3個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間比較，14 d組較7 d組降低（P<0.05或P<0.01），21 d組較14 d組上述指標(biāo)降低（P<0.05或P<0.01）；3個(gè)對(duì)照組之間比較均沒有明顯差異。(2)第二部分結(jié)果：

7、1)Y迷宮行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果，其學(xué)習(xí)和記憶達(dá)標(biāo)次數(shù)，在Aβ+L-Arg組（均為P<0.05）或Aβ+CC組（P<0.05或 P<0.01）與Aβ+NS組比較均減少；在Aβ+L-Arg+CC組與Aβ+L-Arg組（P<0.05或 P<0.01）或Aβ+CC組（P<0.05或P<0.01）比較均減少。2)前額葉皮質(zhì)和海馬各區(qū)nNOS或α7nAChR表達(dá)的積分光密度值和蛋白表達(dá)量，在Aβ+L-Arg組（均為P<0.05）或Aβ+CC組（P<0.0

8、5或P<0.01）與Aβ+NS組比較均增多；在Aβ+L-Arg+CC組與Aβ+L-Arg組（P<0.05或P<0.01）或Aβ+CC組（P<0.05或P<0.01）比較均增多。
　　結(jié)論：
　　(1)在側(cè)腦室注射Aβ誘導(dǎo)的大鼠認(rèn)知障礙模型中，大鼠的學(xué)習(xí)記憶行為能力和前額葉皮質(zhì)及海馬α7nAChR和nNOS表達(dá)隨Aβ作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈進(jìn)行性下降，且二者的表達(dá)變化在前額葉皮質(zhì)淺層和海馬CA3區(qū)最明顯。(2)側(cè)腦室聯(lián)合應(yīng)用L-Arg