擬南芥AtSIRT1基因的功能初探.pdf

1、Apreliminary。“一ofAtSIRArellmlnaryinvestigation1乃i。n0I』ArabidopsisthalianaADissertationSubmittedtoZhejiangUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByHaiyanJinSupervisedbyAssociateProfJun

2、huiWangZhejiangUniversityHangzhou，310058，PRChinaFebruary，2011浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要沉默調(diào)節(jié)蛋白Sirtuin是一組重要的蛋白質(zhì)，它們?cè)谒ダ?、脅迫和代謝的過程中起著十分重要的調(diào)節(jié)功能。哺乳動(dòng)物中共有7個(gè)同源蛋白，而在擬南芥中只有二個(gè)，分別為AtSIRTl(At5909230)和AtSIRT2(At5955760)。本文主要研究表達(dá)在線粒體中AtSIRTl的基因功能。AtSIR

3、Tl具有多個(gè)轉(zhuǎn)錄本，可以產(chǎn)生4種成熟的mRNA，本文中分別命名為S13，S14，S15，S17。半定量RTPCR分析表明，它們?cè)诓煌M織中表達(dá)行為有一定的差別。啟動(dòng)子分析表明AtSIRTl旺盛表達(dá)于分生組織，且受光照調(diào)節(jié)。利用Gateway重組克隆體系構(gòu)建了N端綠色熒光蛋白的融合蛋白表達(dá)株系，發(fā)現(xiàn)除了S14定位于細(xì)胞核，其余均定位于線粒體。用FLAG蛋白標(biāo)簽過量表達(dá)這四種轉(zhuǎn)錄本，分別命名為S13FLAGSI4FLAQS15FLAG和S1

4、7FLAG本文重點(diǎn)研究S13FLAG和S17FLAG的功能。另外，本文還鑒定了AtSIRTl的兩個(gè)TDNA插入突變體株系131994C和N433426。對(duì)S13FLAG，S17FLAG131994C和N433426四個(gè)株系進(jìn)行表型觀察，發(fā)現(xiàn)S17FLAG株系的種子萌發(fā)遲緩，萌發(fā)率低，幼苗個(gè)體偏小，在高糖培養(yǎng)基中，有停止生長(zhǎng)、甚至致死的表型；而S13FLAG，131994C和N433426株系的種子萌發(fā)速度快，幼苗個(gè)體大，在高糖培養(yǎng)基中生

5、長(zhǎng)旺盛。植物體內(nèi)的葡萄糖含量測(cè)定表明，在正常B5和高糖培養(yǎng)基中，131994C和N433426的葡萄糖含量稍低于野生型；S13FLAG在正常B5培養(yǎng)基中的葡萄糖含量與TDNA突變體齊平，而在高糖培養(yǎng)基中卻明顯低于野生型和TDNA突變體；SI7FLAG株系的葡萄糖含量在兩種培養(yǎng)基上均明顯低于野生型。在測(cè)定谷氨酸脫氫酶(GDH)同工酶活性中發(fā)現(xiàn)，S17FLAG株系無論是在B5還是高糖培養(yǎng)基中，其活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于野生型；TDNA突變體在高糖培養(yǎng)中