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1、Apreliminary?!耙籵fAtSIRArellmlnaryinvestigation1乃i。n0I』ArabidopsisthalianaADissertationSubmittedtoZhejiangUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByHaiyanJinSupervisedbyAssociateProfJun
2、huiWangZhejiangUniversityHangzhou,310058,PRChinaFebruary,2011浙江大學碩士學位論文摘要沉默調(diào)節(jié)蛋白Sirtuin是一組重要的蛋白質(zhì),它們在衰老、脅迫和代謝的過程中起著十分重要的調(diào)節(jié)功能。哺乳動物中共有7個同源蛋白,而在擬南芥中只有二個,分別為AtSIRTl(At5909230)和AtSIRT2(At5955760)。本文主要研究表達在線粒體中AtSIRTl的基因功能。AtSIR
3、Tl具有多個轉(zhuǎn)錄本,可以產(chǎn)生4種成熟的mRNA,本文中分別命名為S13,S14,S15,S17。半定量RTPCR分析表明,它們在不同組織中表達行為有一定的差別。啟動子分析表明AtSIRTl旺盛表達于分生組織,且受光照調(diào)節(jié)。利用Gateway重組克隆體系構(gòu)建了N端綠色熒光蛋白的融合蛋白表達株系,發(fā)現(xiàn)除了S14定位于細胞核,其余均定位于線粒體。用FLAG蛋白標簽過量表達這四種轉(zhuǎn)錄本,分別命名為S13FLAGSI4FLAQS15FLAG和S1
4、7FLAG本文重點研究S13FLAG和S17FLAG的功能。另外,本文還鑒定了AtSIRTl的兩個TDNA插入突變體株系131994C和N433426。對S13FLAG,S17FLAG131994C和N433426四個株系進行表型觀察,發(fā)現(xiàn)S17FLAG株系的種子萌發(fā)遲緩,萌發(fā)率低,幼苗個體偏小,在高糖培養(yǎng)基中,有停止生長、甚至致死的表型;而S13FLAG,131994C和N433426株系的種子萌發(fā)速度快,幼苗個體大,在高糖培養(yǎng)基中生
5、長旺盛。植物體內(nèi)的葡萄糖含量測定表明,在正常B5和高糖培養(yǎng)基中,131994C和N433426的葡萄糖含量稍低于野生型;S13FLAG在正常B5培養(yǎng)基中的葡萄糖含量與TDNA突變體齊平,而在高糖培養(yǎng)基中卻明顯低于野生型和TDNA突變體;SI7FLAG株系的葡萄糖含量在兩種培養(yǎng)基上均明顯低于野生型。在測定谷氨酸脫氫酶(GDH)同工酶活性中發(fā)現(xiàn),S17FLAG株系無論是在B5還是高糖培養(yǎng)基中,其活性遠遠高于野生型;TDNA突變體在高糖培養(yǎng)中
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