五倍子、兒茶、連翹、黃連和黃芩五味中藥對(duì)艱難梭菌體外抗菌活性研究.pdf

1、目的：艱難梭菌（Clostridium difficile, CD）屬厭氧性梭菌，CD產(chǎn)毒株的危害性大于非產(chǎn)毒株，兩者均可以定植在人類腸道，是引起抗生素相關(guān)性腹瀉的主要病原菌。CD作為傳播媒介，可在院內(nèi)引起感染以及院外引起流行傳播。由艱難梭菌感染（Clostridium difficile infection, CDI）造成的患者的死亡率在全世界呈上升趨勢(shì)。腹瀉為CDI常見(jiàn)臨床癥狀。進(jìn)入21世紀(jì)后，CD高產(chǎn)毒株027/NAPl/BI在加

2、拿大、北美、歐洲等多地區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)流行，死亡率及復(fù)發(fā)率高。CD形成的芽孢可抵抗多種理化因素，包括醫(yī)院常用的酒精類消毒劑、潮濕土壤、空氣等。目前指南推薦輕、中度CD患者以口服甲硝唑?yàn)橹?，重度患者以口服萬(wàn)古霉素為主。但這兩種藥物治療后可復(fù)發(fā)，并且對(duì)人體的副作用比較大。2011年FDA批準(zhǔn)上市的非達(dá)霉素治療艱難梭菌效果顯著，但其價(jià)錢(qián)昂貴，使其在臨床應(yīng)用受到限制。中藥在我國(guó)有著悠久的歷史，其中很多中藥具有消炎抗菌的作用。有鑒于此,我們選擇了具有收

3、斂固澀作用的五倍子、清熱燥濕作用的黃芩和黃連、以及具有斂瘡功效的兒茶和具有清熱解毒作用的連翹進(jìn)行CD體外抗菌實(shí)驗(yàn)，探討其是否有CD抗菌活性，以便為中藥治療CDI提供思路和方法。
　　方法：
　　1、本實(shí)驗(yàn)所用的菌株來(lái)自河北省醫(yī)學(xué)微生物菌種保存中心（Hebei centre for medical culture collection, HBCMCC）。共選取了來(lái)自不同地區(qū)不同分離期間的130株菌株，根據(jù)菌落形態(tài)、特殊氣味、涂

4、片染色、毒素、質(zhì)譜以及16srDNA測(cè)序等鑒定為CD。
　　2、提取CD基因組DNA，擴(kuò)增16s～23s間隔區(qū)序列并進(jìn)行電泳，根據(jù)電泳的具體位置來(lái)確定CD的PCR核糖體型別，經(jīng)多重PCR擴(kuò)增毒素基因，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳來(lái)確定CD的產(chǎn)毒情況，并研究中藥的MIC和CD的PCR核糖體型別之間的關(guān)系。
　　3、選取中藥五倍子、黃連、黃芩、兒茶及連翹進(jìn)行煎制，采用瓊脂稀釋法對(duì)中藥五倍子、黃連、黃芩、連翹及兒茶進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。
　　結(jié)果

5、：
　　1、本實(shí)驗(yàn)共選取130株CD，菌株主要來(lái)源于石家莊、邢臺(tái)、滄州地區(qū)，時(shí)間從2010到2014年，男女比例為70:60。毒素A毒素B陽(yáng)性二元毒素陰性（tcdA+tcdB+cdtA-cdtB-）的CD數(shù)目是105株，毒素A毒素B陽(yáng)性二元毒素陽(yáng)性（tcdA+tcdB+cdtA+cdtB+）的CD數(shù)目是3株，毒素A毒素B陰性二元毒素陰性（tcdA-tcdB-cdtA-cdtB-）的CD數(shù)目是22株。130株CD的PCR核糖體型別數(shù)

6、目共36個(gè)，其中HB1型最多，共有23株，其次為HB5型18株，HB6型17株，三者共占44.6％（58/130）。
　　2、本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了5味中藥對(duì)130株CD的體外抗菌活性，結(jié)果顯示：五倍子對(duì)CD有較強(qiáng)的抗菌活性，其MIC為0.086-0.249mg/ml，130株CD的MIC分別為：0.086mg/ml(25株)、0.098mg/ml(26株)、0.113mg/ml(27株)、0.125mg/ml(52株)。
　　3、黃

7、連對(duì)130株CD的體外抗菌活性較弱，只測(cè)得12株CD的MIC，分別為：1.268mg/ml（1株）、2.235mg/ml（1株）、2.229mg/ml（1株）、2.392mg/ml（4株）、2.822mg/ml（3株）、2.882mg/ml（2株）、其余118株的MIC>2.229mg/ml。
　　4、兒茶對(duì)130株CD有抗菌活性，其MIC為4.128-22.423mg/ml。130株CD的MIC分別為：16.200mg/ml(4

8、株)、8.100mg/ml(22株)、10.217(26株)、8.256mg/ml(25株)、4.128mg/ml（1株）、22.423mg/ml(1株)、11.212mg/ml(25株)、12.191mg/ml(19株)、6.096mg/ml（7株）。
　　5、通過(guò)黃芩和連翹對(duì)130株CD的體外抗菌實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：黃芩和連翹對(duì)CD無(wú)抗菌活性，其MIC分別為>3.844mg/ml和>3.927mg/ml。
　　6、綜合分析中藥的M

9、IC值和130株CD的PCR核糖體型別的關(guān)系發(fā)現(xiàn)：五倍子的MIC值在本地區(qū)優(yōu)勢(shì)型別（HB1、HB5、HB6）菌株組要低于非優(yōu)勢(shì)型別（除HB1、HB5、HB6之外型別）菌株組（x2=4.084， P=0.043）；兒茶的MIC值在本地區(qū)優(yōu)勢(shì)型別菌株組和非優(yōu)勢(shì)型別菌株組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.019，P=0.89）。
　　結(jié)論：
　　1、五倍子、兒茶和黃連對(duì)CD有體外抗菌活性，期待作為潛在治療藥物。
　　2、黃芩和連