蛋白泛素化降解調(diào)控擬南芥雄配子體發(fā)育的研究.pdf

1、擬南芥花粉發(fā)育過程中，小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂產(chǎn)生四分體后發(fā)育為小孢子。小孢子經(jīng)過不均等的有絲分裂，產(chǎn)生二細(xì)胞花粉，二細(xì)胞花粉的生殖細(xì)胞進(jìn)一步分裂產(chǎn)生兩個精細(xì)胞形成三細(xì)胞花粉。人們通過分子遺傳學(xué)的研究對這一過程有了較為詳細(xì)的理解，但是對某些特定的階段，特別是減數(shù)分裂完成后的細(xì)胞周期過程的調(diào)控機(jī)理仍然不是很清楚。
　　 本研究分離了一個編碼擬南芥蛋白泛素化降解系統(tǒng)F-box蛋白的基因F-box/LRR（FBL）的T-DNA插入突變體。

2、亞歷山大染色表明，該基因的突變導(dǎo)致花粉敗育；配子傳遞效率分析顯示，突變體的雄配子傳遞效率幾乎為零，而突變對雌配子的傳遞效率的影響要小得多，這表明FBL主要影響雄配子體的育性。用DAPI對花粉的染色發(fā)現(xiàn)，fbl突變體的花粉發(fā)育停留在單細(xì)胞時期，表明fbl突變影響了單細(xì)胞花粉向二細(xì)胞花粉的轉(zhuǎn)變過程。
　　 RT-PCR分析顯示FBL在細(xì)胞分裂旺盛的愈傷中表達(dá)量最高，推測FBL可能通過降解細(xì)胞周期的抑制因子而起作用。KRP6是細(xì)胞周期

3、蛋白依賴性蛋白激酶的抑制因子，花粉發(fā)育過程中KRP6被泛素化降解是細(xì)胞分裂正常進(jìn)行的必要條件。酵母雙雜交結(jié)果表明FBL可能通過其LRR亞基與KRP6相互作用，推測FBL可能通過降解KRP6來解除其對細(xì)胞周期的抑制作用。
　　 ASK家族蛋白連接F-box蛋白與Cullinl構(gòu)成SCF復(fù)合體。酵母雙雜交分析發(fā)現(xiàn)FBL可以與ASK家族多個蛋白ASK11、ASK16、ASK18存在相互作用，表明FBL可能通過多個ASK來形成SCFFB

4、L復(fù)合體。RHF1a、RHF2a是兩個在PMI中起重要的作用調(diào)節(jié)因子，也參與了KRP6的降解。利用細(xì)胞周期數(shù)據(jù)庫Cyclbase（www.cyclbase.org）分析了FBL、RHF1a、RHF2a，的表達(dá)模式，發(fā)現(xiàn)FBL基因主要在M-G1-S時期表達(dá)，而RHF1a/2a則在S-G2-M轉(zhuǎn)變時期表達(dá)。推測FBL與RHF1a/2a可能在細(xì)胞周期不同的階段分別降解KRP6。
　　 綜上所述，得出以下結(jié)論：在擬南芥的花粉發(fā)育過程中，