新生兒腸道耐藥基因調(diào)查及來源研究.pdf

1、目前，抗生素在臨床、畜牧和水產(chǎn)業(yè)廣泛的使用，導(dǎo)致環(huán)境出現(xiàn)了大量的耐藥菌(ARB)。這些耐藥菌的出現(xiàn)，增加了治療感染性疾病的難度，給疾病的預(yù)防和控制提出了新的挑戰(zhàn)。同時(shí)，耐藥菌攜帶的耐藥基因(ARGs)會(huì)通過水平轉(zhuǎn)移的方式向其他微生物轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致敏感菌株獲得耐藥性，加快了耐藥菌的污染擴(kuò)散。通過抗生素的作用和耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移，當(dāng)前已經(jīng)出現(xiàn)對多種抗生素耐藥的多重耐藥菌，甚至是超級耐藥菌，對人類的健康造成重大威脅。
　　人腸道包含著豐富的

2、微生物菌群，對人的營養(yǎng)吸收及生理機(jī)能有著重要作用。隨著抗生素在臨床上的濫用，耐藥菌在人群中已經(jīng)普遍傳播。目前在人腸道中分離了多種耐藥菌，發(fā)現(xiàn)了上千種的耐藥基因，甚至在新生兒胎便中也發(fā)現(xiàn)了耐藥菌和耐藥基因。新生兒免疫系統(tǒng)發(fā)育還不夠完善，腸道中的耐藥菌能夠使抗生素失效，可能會(huì)導(dǎo)致新生兒感染甚至死亡。母親腸道菌可以通過淋巴及血液系統(tǒng)向子宮內(nèi)移位，因此，新生兒腸道菌群的定植開始于胎兒時(shí)期，新生兒娩出之后初乳以及環(huán)境微生物開始進(jìn)入新生兒腸道。影響

3、新生兒菌群早期定植的環(huán)境因素主要包括羊水、初乳和醫(yī)院空氣。如果新生兒接觸的環(huán)境含有耐藥菌，那么耐藥菌就可能伴隨正常菌群定植于新生兒腸道。目前，新生兒腸道耐藥菌及耐藥基因的來源尚不清楚，因此，需要追溯新生兒腸道耐藥菌的來源，減少新生兒腸道耐藥菌的定植，保障新生兒的健康。
　　為評估新生兒腸道耐藥菌及耐藥基因的來源，本研究采集了82對剖腹產(chǎn)母親樣品（羊水、初乳）和母乳喂養(yǎng)新生兒糞便樣品（第一次、第三天），同時(shí)采集了醫(yī)院病房空氣樣本12

4、份。本研究選取了7種耐藥基因，blaTEM、ampC、mecA屬于β-內(nèi)酰胺類，aac(6')-Ib、ermB、sul2、tetM分別屬于氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類、四環(huán)素類。本研究主要從以下三個(gè)方面進(jìn)行了研究:①新生兒腸道糞便（第一次、第三天）及所接觸的環(huán)境樣品羊水、初乳和空氣耐藥基因的檢測和分析，②針對細(xì)菌16SrDNA進(jìn)行高通量測序技術(shù)分析新生兒腸道糞便（第一次、第三天）和環(huán)境樣品（羊水、初乳）菌群特點(diǎn)及關(guān)系③利用多位點(diǎn)序列分

5、析(MLST)對新生兒腸道糞便和環(huán)境樣品（初乳、空氣）中表皮葡萄球菌溯源分析。本文主要結(jié)果如下:
　　(1)新生兒第三天糞便檢測到7種耐藥基因，糞便樣品最多同時(shí)含有四種耐藥基因，占比8.5％，新生兒第一次糞便未檢測到耐藥基因。性別對新生兒腸道耐藥基因的定植沒有影響。新生兒第三天的糞便中mecA基因檢出率最高，為45.1％。blaTEM、ampC、aac(6')-Ib、ermB、sul2、tetM的檢出率分別為25.6％、28％、2

6、2％、17.1％、29.3％、20.7％。在第三天糞便樣品中，最大值分別達(dá)到1.25×109copies/g、4.19×106copies/g、7.33×109copies/g、3.87×107copies/g、1.26×106copies/g、9.76×106copies/g、2.08×106copies/g、8.98×109copies/g。
　　(2)初乳檢測到7種耐藥基因，初乳樣品最多同時(shí)含有四種耐藥基因，占比3.7％。病

7、房空氣中檢測到4種，分別為ampC、mecA、ermB、tetM，羊水中未檢測到耐藥基因。初乳中mecA檢出率最高，為36.6％，與新生兒第三天糞便一致。blaTEM、ampC、aac(6')-Ib、ermB、sul2、tetM檢出率分別為24.4％、15.9％、24.4％、17.1％、25.6％、17.1％。
　　(3)利用配對卡方檢驗(yàn)，ampC耐藥基因在糞便與母乳樣品中檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而空氣中ampC檢出率最高，達(dá)到41.

8、7％，表明空氣是糞便ampC的重要來源。初乳和糞便中7種耐藥基因檢出結(jié)果全部有關(guān)聯(lián)，各個(gè)耐藥基因在兩組樣品中的重合率達(dá)到39.1％-66.7％，即糞便中耐藥基因來源于初乳的可能性達(dá)到39.1％-66.7％，說明初乳中的耐藥基因通過喂食新生兒有很大一部分隨著耐藥菌在腸道內(nèi)定植下來。
　　(4)新生兒腸道菌群和環(huán)境菌群（羊水、初乳）有較大的重合。母親羊水和新生兒第一次糞便雖未檢測到可培養(yǎng)的微生物，但是通過高通量測序技術(shù)，鹽單胞菌屬、希

9、瓦氏菌屬、弧菌屬為其三大優(yōu)勢菌屬。初乳中鹽單胞菌、鏈球菌、葡萄球菌屬為三大優(yōu)勢菌。新生兒第三天糞便三大優(yōu)勢菌為不動(dòng)桿菌，梭菌和鹽單胞菌。羊水和新生兒第一次糞便菌群類似，二者的微生物菌群結(jié)構(gòu)并無差異，新生兒腸道菌群在胎兒時(shí)期便已經(jīng)開始定植。在新生兒娩出后，母體初乳、第一次糞便和第三天糞便菌群結(jié)構(gòu)有差異。可以認(rèn)為初乳和羊水共同對新生兒腸道菌群的定植有重要影響，間接說明初乳和羊水耐藥基因可能對新生兒腸道的垂直傳播。
　　(5)新生兒第三

10、天糞便和對應(yīng)初乳分離的表皮葡萄球菌具有較高的同源率。通過多位點(diǎn)序列分析，兩種來源的表皮葡萄球菌序列一致性達(dá)到63.4％，其中ST2型為分離最多的型別，達(dá)到34.6％。每一對表皮葡萄球菌耐藥情況和耐藥基因攜帶情況均一致，分別為同一菌株?？諝鈦碓吹谋砥て咸亚蚓蛄兄杏腥闟T2型菌株分別與3株糞便來源的表皮葡萄球菌是同一菌株，并且耐藥基因攜帶情況一致，說明新生兒糞便耐藥基因既來自于初乳也來源于空氣。
　　綜上所述，新生兒腸道的菌群定植