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1、分類號:學(xué)校代碼:10373密級:學(xué)號:10815071104碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文題目題目:一個與磁螺菌MSR1磁小體合成密切相關(guān)基因編碼蛋白的定位論文作者陳奇指導(dǎo)教師李峰專業(yè)名稱植物學(xué)研究方向應(yīng)用微生物應(yīng)用微生物淮北師范大學(xué)研究生處2011年6月10日I一個與磁螺菌MSR1磁小體合成密切相關(guān)基因編碼蛋白的定位陳奇(植物學(xué))陳奇(植物學(xué))摘要:MagospirillumgryphiswaldenseMSR1為趨磁螺菌屬(Magosp
2、irillum)的模式菌株,能夠合成鏈狀排列、具有外膜包被的Fe3O4磁性顆?!判◇w。李峰利用miniTn5lacZ2對磁螺菌MSR1進(jìn)行轉(zhuǎn)座插入突變,獲得磁小體缺失突變株NM21,并通過錨定PCR從NM21中克隆出Tn5插入位點的側(cè)翼序列,獲得長3073bp的DNA片段,此片段由3個F組成,對其中的F1編碼的蛋白進(jìn)行分析,推測它可能位于磁小體膜上,且具有轉(zhuǎn)運Fe2的功能,在去除Fe2對細(xì)胞毒害的過程中起著重要作用。為證實這一推論,本
3、文研究了磁螺菌MSR1中F1編碼蛋白的亞細(xì)胞定位。利用一些生物學(xué)軟件,分析發(fā)現(xiàn)F1讀碼框編碼320個氨基酸,含有5個疏水區(qū)、4個跨膜結(jié)構(gòu)、18個蛋白磷酸化位點、8個α螺旋、3個β折疊、可能位于質(zhì)膜上,這些信息有助于對F1編碼蛋白的研究。以MSR1野生菌株基因組DNA為模板,PCR克隆F1,以pEGFPN1載體為模板,克隆EGFP;以MSR1野生菌株基因組DNA為模板,PCR克隆F1‘,以pEGFPN1載體為模板,克隆EGFP‘,分別插入
4、廣宿主表達(dá)載體pBBR1MCS2,構(gòu)建成融合表達(dá)載體pBBRMSF1EGFP和pBBRMSEGFP‘F1‘,酶切并測序鑒定后分別轉(zhuǎn)入EscherichiacoliS171,將成功轉(zhuǎn)入重組質(zhì)粒的E.coliS171與MSR1接合,篩選接合子并誘導(dǎo)表達(dá),熒光顯微鏡分析發(fā)現(xiàn)重組蛋白在磁螺菌MSR1中定位于磁小體膜上。同時以MSR1野生菌株基因組DNA為模板,PCR克隆F1‘,將其與載體pET29a連接,構(gòu)建成原核表達(dá)載體pET29aF1‘,酶
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