2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、細菌磁小體(BMPs)是趨磁細菌細胞內合成的磁性納米顆粒,其組成為Fe<,3>O<,4>的晶體以脂膜包被。磁小體具有優(yōu)良載體的性質,分別在固定化酶、吸附核酸用于基因槍彈、連接抗體進行免疫檢測和載藥后進行靶向治療腫瘤等方面,具有廣闊的應用前景。 本室的前期研究已經解決了趨磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswaldense)的深層培養(yǎng)問題,細胞的培養(yǎng)水平高于目前報道的5倍以上。本論文對純化磁小體的多種方法進行比

2、較,證明了細胞壓榨機對細胞的破碎效果優(yōu)于超聲波,一次(1000 psi)可破碎90%的細胞,而在后續(xù)的洗滌步驟中,只需采用超聲波輕微擊打,配合磁鐵吸附回收,即可獲得純凈的磁小體。純化的磁小體分別經電鏡、紅外和能譜進行檢測。電鏡觀察表明,純化磁小體的晶型穩(wěn)定,顆粒均勻,直徑多在25~45nm,外膜完整;不同批次純化的磁小體在PBS緩沖體系(pH 7.4)中的紅外檢測波峰分布一致,能譜檢測結果顯示純化的磁小體含有C、O、Fe、P、N等元素,

3、無其他雜質存在,配合生化方法檢測,建立了純凈磁小體標準紅外譜圖,并建議將其作為批量生產的檢測標準。 比較并摸索了多種磁小體的滅菌方法,實驗結果證明,r-射線滅菌是一種簡便有效的手段。經MTT實驗證明,滅菌后的磁小體對小鼠纖維原細胞L-929無毒害,利用家兔法證明純凈磁小體不含內毒素,可以將磁小體作為載體應用到細胞和動物體內的實驗中。 通過優(yōu)化磁小體與乙肝表面抗原抗體的連接方法,使連接效率提高到527μg抗體/mg磁小體。

4、選用辣根過氧化物酶系統(tǒng)結合化學發(fā)光,用雙抗體夾心法檢測乙肝表面抗原,檢測限可達到0.1ng/ml,靈敏度比酶免方法提高了5倍。通過對臨床109份血清樣本的檢測,結果與酶免的方法100%吻合,說明該方法可以應用到臨床樣本的檢測中。 利用聚乙烯亞胺(PEI)將BMPs和DNA連接形成復合物,進行體外細胞轉染及動物體內基因傳遞實驗,結果證實BMPs-PEI體系不僅能有效地將DNA遞送到細胞內和動物體內并正常表達,也可作為核酸疫苗的增強

5、劑而極大地刺激體內的免疫反應。當PEI與DNA的N/P比為8時,BMPs-PEI能達到較佳的轉染效果;當N/P為8時,BMPs與DNA的質量比在0.5:1時轉染效率可以達到最高。當BMPs存在時,BMPs-PEUDNA復合物可以抵御DNase-I的“消化”作用。在磁場的作用下,BMP-PEI/DNA能加速到達細胞的表面促進質粒DNA進入細胞。BMPs-PEI之所以能起到提高轉染效率的作用,可能的原因是該系統(tǒng)具備滲透溶酶體的能力,促使目的

6、DNA順利到達細胞核內。BMPs-PEI和BMPs-PEI/DNA復合物對細胞幾乎沒有毒性。這是因為BMPs的膜上本身帶有負電荷,可以中和一部分PEI上的正電荷,從而減輕對細胞的傷害。在磁場的作用下BMPs-PEI系統(tǒng)能明顯增強β-半乳糖苷酶在體內的表達水平。以口蹄疫病毒核酸疫苗為實驗材料,檢測了BMPs-PEI在體內引起細胞免疫和體液免疫的水平,在磁場的作用下,該系統(tǒng)能顯著增強機體免疫應答水平。因此,BMPs-PEI可以作為一種新型的

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