鏈霉親和素-熒光藻膽蛋白的構(gòu)建及在熒光免疫檢測中的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、熒光免疫檢測技術(shù)在現(xiàn)實(shí)生活中應(yīng)用日益廣泛，遍及環(huán)境污染物監(jiān)測、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)等諸多領(lǐng)域，發(fā)展迅速。本研究所涉及的生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)（BSA）
　　 是具有靈敏度高、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定性好的信號(hào)多級(jí)放大系統(tǒng)；同時(shí)藻膽蛋白的光學(xué)和物理性質(zhì)非常符合新一代熒光免疫標(biāo)記物的要求。
　　 本研究以pUC57-sa 質(zhì)粒為模板，通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增出目的基因片段sa，構(gòu)建表達(dá)載體pETDuet-sa。通過大腸桿菌異源表達(dá)，成功制備核

2、心鏈霉親和素，對(duì)其表達(dá)、活性和保存條件等方面進(jìn)行研究，其分子量為59.2KD，理論活性為16.5u，實(shí)測活性16.3u，凍干后可以穩(wěn)定保存。
　　 將SA-CpcB、藻紅膽素合成酶及藻膽蛋白裂合酶進(jìn)行大腸桿菌體內(nèi)共表達(dá)，得到融合色素蛋白SA-CpcB-PEB。檢測SA-CpcB-PEB的熒光活性，同時(shí)將其用于BSA系統(tǒng)中進(jìn)行熒光免疫檢測，表明SA-CpcB-PEB 同時(shí)具有藻膽蛋白的熒光特性和SA與生物素結(jié)合的能力。將SA-Cp

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