動物組織中氯霉素和萊克多巴胺殘留的時間分辨熒光免疫檢測方法的研究.pdf

1、時間分辨熒光免疫分析(Time-resolvedFluoroimmunoassay，TrFIA)是利用鑭系絡合物作為標記物的的新型免疫分析技術，其絡合物具有熒光壽命長、激發(fā)光譜帶較寬、發(fā)射光譜帶甚窄和Stokes位移(最大激發(fā)光波長與最大發(fā)射光波長之差)大等特點，可以消除背景熒光的干擾，有效提高檢測方法的靈敏度。 本文首先合成了氯霉素單抗-DTTA-Eu3+、萊克多巴胺單抗-DTTA-Eu3+和萊克多巴胺單抗-DTTA-Sm3+

2、，用于研究建立動物組織中獸藥殘留的時間分辨熒光免疫檢測方法。建立了蝦和雞肉組織中氯霉素殘留的時間分辨熒光免疫檢測方法。以CAP-OVA作為包被抗原，稀釋比為1∶3000，以氯霉素單抗-DTTA-Eu3+作為競爭反應物，稀釋比為1∶200，競爭反應時間為1小時。方法的檢測限為0.05ng/g，當添加濃度為0.1、1和5ng/g時，蝦肉的回收率為101.2％～112.5％，批內變異系數(shù)為8.7％～14.6％，批間變異系數(shù)為9.6％～17.8

3、％；雞肉的回收率為104.9％～115.3％，批內變異系數(shù)為9.5％～12.1％，批間變異系數(shù)為10.8％～16.2％。與ELISA試劑盒和氣相色譜方法分別進行對比檢測，相關性良好。建立了豬肌肉和肝臟組織中萊克多巴胺殘留的時間分辨熒光免疫檢測方法。以RAC-OVA作為包被抗原，稀釋比為1∶400，以萊克多巴胺單抗-DTTA-Eu3+(稀釋比為1∶100)作為競爭反應物，方法的檢測限為0.28ng/g，當添加濃度為1、5和10ng/g時，

4、豬肉組織的回收率為88.2％～110.6％，批內變異系數(shù)為7.1％～13.6％，批間變異系數(shù)為14.3％～17.1％；豬肝組織的回收率為102.3％～118.5％，批內變異系數(shù)為8.9％～16.4％，批間變異系數(shù)為15.8％～20.5％，以ELISA試劑盒進行了對比試驗，相關性良好。通過豬組織的殘留消除試驗，對建立的方法進行了應用確證研究。建立了同時測定豬肌肉組織中氯霉素和萊克多巴胺殘留的雙標記時間分辨熒光免疫檢測方法。以RAC-OVA

5、(稀釋比為45/20000)和CAP-OVA(稀釋比為6.7/20000)作為混合包被抗原，以氯霉素單抗-DTTA-Eu3+和萊克多巴胺單抗-DTTA-Sm3+作為混合競爭反應物，方法對氯霉素的添加回收率為102％-121.1％，批內變異系數(shù)為12.4％-16.8％，批間變異系數(shù)為17.2％-19.6％；對萊克多巴胺的添加回收率為69.8％-85.8％，批內變異系數(shù)為10.1％-16.3％，批間變異系數(shù)為18.6％-21.3％。與ELI