動(dòng)物組織中氯霉素和萊克多巴胺殘留的時(shí)間分辨熒光免疫檢測方法的研究.pdf

1、時(shí)間分辨熒光免疫分析(Time-resolvedFluoroimmunoassay，TrFIA)是利用鑭系絡(luò)合物作為標(biāo)記物的的新型免疫分析技術(shù)，其絡(luò)合物具有熒光壽命長、激發(fā)光譜帶較寬、發(fā)射光譜帶甚窄和Stokes位移(最大激發(fā)光波長與最大發(fā)射光波長之差)大等特點(diǎn)，可以消除背景熒光的干擾，有效提高檢測方法的靈敏度。 本文首先合成了氯霉素單抗-DTTA-Eu3+、萊克多巴胺單抗-DTTA-Eu3+和萊克多巴胺單抗-DTTA-Sm3+

2、，用于研究建立動(dòng)物組織中獸藥殘留的時(shí)間分辨熒光免疫檢測方法。建立了蝦和雞肉組織中氯霉素殘留的時(shí)間分辨熒光免疫檢測方法。以CAP-OVA作為包被抗原，稀釋比為1∶3000，以氯霉素單抗-DTTA-Eu3+作為競爭反應(yīng)物，稀釋比為1∶200，競爭反應(yīng)時(shí)間為1小時(shí)。方法的檢測限為0.05ng/g，當(dāng)添加濃度為0.1、1和5ng/g時(shí)，蝦肉的回收率為101.2％～112.5％，批內(nèi)變異系數(shù)為8.7％～14.6％，批間變異系數(shù)為9.6％～17.8

3、％；雞肉的回收率為104.9％～115.3％，批內(nèi)變異系數(shù)為9.5％～12.1％，批間變異系數(shù)為10.8％～16.2％。與ELISA試劑盒和氣相色譜方法分別進(jìn)行對比檢測，相關(guān)性良好。建立了豬肌肉和肝臟組織中萊克多巴胺殘留的時(shí)間分辨熒光免疫檢測方法。以RAC-OVA作為包被抗原，稀釋比為1∶400，以萊克多巴胺單抗-DTTA-Eu3+(稀釋比為1∶100)作為競爭反應(yīng)物，方法的檢測限為0.28ng/g，當(dāng)添加濃度為1、5和10ng/g時(shí)，

4、豬肉組織的回收率為88.2％～110.6％，批內(nèi)變異系數(shù)為7.1％～13.6％，批間變異系數(shù)為14.3％～17.1％；豬肝組織的回收率為102.3％～118.5％，批內(nèi)變異系數(shù)為8.9％～16.4％，批間變異系數(shù)為15.8％～20.5％，以ELISA試劑盒進(jìn)行了對比試驗(yàn)，相關(guān)性良好。通過豬組織的殘留消除試驗(yàn)，對建立的方法進(jìn)行了應(yīng)用確證研究。建立了同時(shí)測定豬肌肉組織中氯霉素和萊克多巴胺殘留的雙標(biāo)記時(shí)間分辨熒光免疫檢測方法。以RAC-OVA

5、(稀釋比為45/20000)和CAP-OVA(稀釋比為6.7/20000)作為混合包被抗原，以氯霉素單抗-DTTA-Eu3+和萊克多巴胺單抗-DTTA-Sm3+作為混合競爭反應(yīng)物，方法對氯霉素的添加回收率為102％-121.1％，批內(nèi)變異系數(shù)為12.4％-16.8％，批間變異系數(shù)為17.2％-19.6％；對萊克多巴胺的添加回收率為69.8％-85.8％，批內(nèi)變異系數(shù)為10.1％-16.3％，批間變異系數(shù)為18.6％-21.3％。與ELI