動物組織中萊克多巴胺殘留免疫檢測方法研究.pdf

1、本文以butane-1,4-diol diglycidyl ether作為連接臂,采用直接偶聯(lián)法,將半抗原萊克多巴胺與載體蛋白.牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián)作為免疫抗原RAC-BSA進行動物免疫,與辢根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)得酶標抗原RAC-HRP,作為直接競爭酶聯(lián)免疫的酶標記物；采用琥珀酸酐.混合酸酐法合成RAC-OVA,作為間接競爭的包被抗原進行抗血清效價測定。
　　 通過特定的免疫程序,免疫日本大耳白兔,獲得了親合性很高的

2、抗萊克多巴胺的抗血清,經(jīng)免疫親和層析法純化后獲得多克隆抗體,建立直接競爭酶聯(lián)免疫檢測方法。結(jié)果表明,此方法具有較高的靈敏度,IC50為0.9ng/mL,檢出限(IC15)為0.15 ng/mL；除了與多巴酚丁胺的交叉反應(yīng)為7.5％外,與克倫特羅、沙丁胺醇、特步他林、異丙腎上腺素、和異奎胍均無交叉現(xiàn)象,說明抗體特異性較高。選擇四種動物樣品進行基質(zhì)影響消除的研究,結(jié)果表明,采用PBS進行5倍提取后,便可消除基質(zhì)影響,不需要有機溶劑和其他凈化

3、步驟,樣品中的檢出限達0.5 μg/kg；在樣品中添加三個水平的萊克多巴胺濃度,回收率達60％以上,為萊克多巴胺快速檢測試劑盒的研制奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 為開發(fā)快速檢測試劑盒,論文進一步驗證了抗體和酶標抗原穩(wěn)定性及貯存條件。研究表明,抗體和酶標在4℃條件下儲存半年以上而不影響檢測性能,有利于萊克多巴胺試劑盒的推廣和應(yīng)用,從而實現(xiàn)對萊克多巴胺的有效監(jiān)控。
　　 在建立了萊克多巴胺酶聯(lián)免疫檢測方法的基礎(chǔ)上,還研究建立了萊克