基于磁性微粒的萊克多巴胺檢測和DNA純化方法的建立.pdf

1、磁性微粒是超順磁性納米粒子與有機(jī)或無機(jī)材料通過包覆、交聯(lián)等方式而形成的納微米級復(fù)合粒子。磁性微粒具有超順磁性、較高的比表面積、可修飾功能基團(tuán)等特性。因此，將抗原/抗體、酶、核酸/寡核苷酸、小分子藥物等固定在其表面，可用于免疫學(xué)檢測、核酸純化、細(xì)胞分選、藥物載體和酶的固定化等生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。分別以兩種不同的磁性微粒(金磁微粒和羧基末端硅烷化磁性微粒)為載體，本研究建立了苯酚型β-興奮劑萊克多巴胺的檢測方法和從生物樣品中方便、快速純化。D

2、NA的方法。 具有組裝結(jié)構(gòu)的金磁微粒(Fe<,3>O<,4>/Au)是結(jié)合磁性氧化物粒子和膠體金特點(diǎn)的復(fù)合微粒，兼有在外磁場中可分離及生物分子快速固定化等特點(diǎn)。將萊克多巴胺與卵清蛋白的偶聯(lián)物(RCT-OVA)固定在金磁微粒表面，利用間接競爭酶聯(lián)免疫吸附檢測(IC-EIASA)的原理建立了萊克多巴胺定量分析方法并用于動物尿液、飼料和組織中的萊克多巴胺含量的測定。對抗原在金磁微粒表面的固定化濃度、單克隆抗體稀釋度等條件進(jìn)行優(yōu)化，繪制

3、了萊克多巴胺測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線并確定了方法的檢測限、回收率等參數(shù)，同時對萊克多巴胺與其它β-興奮劑的交叉反應(yīng)率也進(jìn)行了測定。結(jié)果表明：在1～100 ppb的濃度范圍內(nèi)方法的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.993，最低檢測限為0.668 ppb；回收率在72.6～106.2％之間，變異系數(shù)不超過13.4％。其它β-興奮劑與RCT抗體交叉反應(yīng)率均很低。整個反應(yīng)(包括樣品制備)可在4 h內(nèi)完成。與市售酶標(biāo)板為載體的檢測試劑盒相比較，金磁微粒作為固相載

4、體可提高檢測的靈敏度，同時線性關(guān)系、最低檢測限、回收率和變異系數(shù)等參數(shù)符合免疫學(xué)檢測要求，本方法可用于尿液、飼料和組織中萊克多巴胺含量的測定。 本論文以表面含有羧基的硅烷化磁性微粒為載體，系統(tǒng)開展了從全血和唾液中純化基因組DNA，從大腸桿菌中純化質(zhì)粒DNA的方法研究。對裂解液的組成、磁性微粒的種類及用量、固定體系中固定緩沖液的體積比等參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，建立了小規(guī)模較為穩(wěn)定的從全血中純化基因組 DNA、從細(xì)菌中純化質(zhì)粒DNA的方法，

5、并對DNA得率、重復(fù)性、批間差等進(jìn)行了測定。本論文初步建立了從唾液中純化DNA的方法。結(jié)果表明：0.1 mg羧基磁性微粒可用于純化200μL全血的基因組DNA，得率在3～7μg之間，OD<,260>/OD<,280>在1.7～1.9之間，CV值小于8％。DNA產(chǎn)率高于國內(nèi)試劑盒的指標(biāo)，可與國外產(chǎn)品媲美；初步建立了0.1 mg羧基磁性微粒純化200 μL唾液中的基因組DNA的方法，得率在0.5-4μg之間；0.2 mg羧基磁性微?？捎糜诩?/p>