磁性復(fù)合微粒在mRNA純化中的應(yīng)用.pdf

1、磁性復(fù)合微粒是由高分子或無機材料與磁性超細(xì)粉末(如鐵的氧化物、鐵、鈷、鎳等金屬)構(gòu)成的具有超順磁性的膠態(tài)材料。磁性復(fù)合微?？稍谕饧哟艌鲋斜豢焖俜蛛x，反復(fù)操作無磁記憶性。此外，通過物理吸附或其表面功能基團(tuán)(如羧基、羥基、氨基等)的作用，可將抗體、酶、核酸、小分子探針及藥物等分子固定在其表面?；诖判詮?fù)合微粒的超順磁性以及表面生物分子可修飾的特點，磁性復(fù)合微粒已被廣泛用于細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、臨床診斷與治療等研究領(lǐng)域。 生物

2、樣品中mRNA的分離純化是分子生物學(xué)研究的前提和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以磁性復(fù)合微粒為載體的mRNA化方法高效、快捷，獲得的mRNA分子完整。國外已有相關(guān)產(chǎn)品，但售價昂貴，難以普及，國內(nèi)在此方面的研究與開發(fā)還較為落后。本研究以不同組成的微米級磁性復(fù)合微粒為材料，將oligo(dT)通過共價作用或鏈親和素-生物素的相互作用固定在磁性復(fù)合微粒的表面，并以此為載體開展了從不同動、植物組織中純化mRNA的研究。 將表面硅烷化含氨基末端的磁性Fe<

3、,3>O<,4>微粒以苯二異硫氰酸酯活化，進(jìn)而將氨基標(biāo)記的oligo(dT)<,20>共價偶聯(lián)在其表面，并系統(tǒng)開展了從不同動、植物組織總RNA中提取mRNA的研究。結(jié)果表明：1 mg磁性復(fù)合微粒可偶聯(lián)氨基標(biāo)記oligo(dT)<,20>的量在0.85 nmol～0.9 nmol之間。從100μg大鼠肝臟、腎臟、脾臟總RNA中可分別提取得到2.26μg、2.45μg、1.77μg的mRNA；從100μg苜蓿草、小葉女貞的總RNA中可分別提

4、取得到0.93μg、1.58μg的mRNA。得到的mRNA在260 nm和280 nm的吸光度值的比值(OD<,260>/OD<,280>)在1.8～2.0之間，表明mRNA具有較高的純度。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，mRNA呈清晰慧尾片狀條帶。以大鼠肝中提取的mRNA為模板，對β-actin基因的逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可得到分子量為240 bp的目的DNA片段。表明純化的mRNA分子完整，提取過程中未降解。對表面偶聯(lián)有oligo(dT)<