藻膽蛋白熒光探針的制備與優(yōu)化.pdf

1、免疫測定技術(shù)已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領(lǐng)域，尤其是標(biāo)記免疫測定技術(shù)近年來更是得到突飛猛進(jìn)的發(fā)展。從標(biāo)記物種類可將標(biāo)記免疫測定技術(shù)分放射性和非放射性兩種，針對全球綠色、安全、無污染的環(huán)保要求，非放射性免疫測定技術(shù)得到了更為迅速的發(fā)展。而在眾多的非放射性標(biāo)記免疫分析中，又以熒光標(biāo)記最為靈敏。本研究中所利用的藻膽蛋白，因其優(yōu)良的物理及光學(xué)特性而成為免疫測定技術(shù)中良好的熒光標(biāo)記物。
　　 本研究中，在實(shí)驗(yàn)室已成功構(gòu)建的質(zhì)

2、粒pET-cpcB基礎(chǔ)上，構(gòu)建了鏈霉親和素和脫輔基蛋白的融合表達(dá)質(zhì)粒pET-cpcB-sa，并將融合基因pET-cpcB-sa分別與藻藍(lán)色素、藻紅色素催化酶及藻膽蛋白裂和酶CpeS在大腸桿菌體內(nèi)共表達(dá)，得到融合蛋白PCB-CpcB-SA、PEB-CpcB-SA，但以此方式得到的融合蛋白PCB-CpcB-SA、PEB-CpcB-SA中色素含量不高；在通過優(yōu)化體內(nèi)重組表達(dá)條件依然無法提高融合蛋白中色素含量的情況下，通過體外重組的方式，得到了

3、熒光活性和色素含量都較高的PEB-CpcB-SA，而體外重組得到的PCB-CpcB-SA與體內(nèi)重組的差別不大。利用PEB-CpcB-SA來檢測包被于聚苯乙烯微量反應(yīng)板的All5292蛋白，證實(shí)該融合蛋白確可用于免疫檢測。同時(shí)，利用戊二醛交聯(lián)的方式得到了PEB-CpcB-SA、CPC-CpcB-SA，通過微孔板熒光免疫反應(yīng)檢測，證實(shí)此種方式得到的融合蛋白亦可用于免疫檢測。
　　 鏈霉親和素標(biāo)記藻膽蛋白制成的熒光探針，融合了鏈霉親和