巰基蛋白質(zhì)熒光分子探針的制備與應(yīng)用.pdf

1、巰基蛋白質(zhì)是動物組織和體液中重要的組成部分，對它的濃度檢測有重要的意義。傳統(tǒng)的檢測巰基蛋白質(zhì)的方法有碘量法、硝普鹽法、分光光度法、電流分析法以及比色法等，但這些方法存在檢測過程復(fù)雜，操作繁瑣，靈敏度低等缺點，使巰基蛋白質(zhì)的研究與檢測受到了很大的限制。卟啉具有良好的光學(xué)性質(zhì)，高的熒光效率，相對長的熒光激發(fā)（400 nm左右)和發(fā)射(660 nm左右)波長等特點，在近紅外熒光（大于600 nm)光區(qū)，生物樣品的熒光強度很小，可降低背景熒光干

2、擾。馬來酰亞胺基具有能夠與巰基特異性結(jié)合的特點。本課題利用卟啉與馬來酰亞胺基的這些特點設(shè)計合成了以卟啉為熒光基團，馬來酰亞胺基為識別基團的四種馬來酰亞胺基苯基卟啉熒光分子探針，采用該探針對含有巰基的牛血清白蛋白（BSA）進行定量檢測。
　　采用Adler法，以對硝基苯甲醛、吡咯、對甲基苯甲醛、對甲氧基苯甲醛、對羥基苯甲醛、對羧基苯甲醛、乙酸酐、順丁烯二酸酐為原料，合成了四種馬來酰亞胺基苯基卟啉化合物：5-(4-馬來酰亞胺基苯基)-

3、10,15,20-三(4-甲基苯基)卟啉P1、5-(4-馬來酰亞胺基苯基)-10,15,20-三(4-甲氧基苯基)卟啉P2、5-(4-馬來酰亞胺基苯基)-10,15,20-三(4-羥基苯基)卟啉P3、5-(4-馬來酰亞胺基苯基)-10,15,20-三(4-羧基苯基)卟啉P4。
　　采用紅外光譜、紫外-可見吸收光譜、核磁共振氫譜、元素分析等手段對目標(biāo)化合物 P1、P2、P3、P4的結(jié)構(gòu)進行了表征。分別考察了熒光分子探針 P1、P2、

4、P3、P4對BSA的定量檢測效果，探究了以上四種熒光分子探針對BSA定量檢測的最佳實驗條件以及干擾物質(zhì)對該檢測的影響。
　　實驗結(jié)果證明，合成的四種化合物與目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)一致。熒光分子探針 P1、P2、P3對BSA的檢測線性范圍均為0~2.0×10-8 mol/L，探針P4對BSA的檢測線性范圍為0~1.0×10-8 mol/L，線性方程、相關(guān)系數(shù)R值以及檢出限分別為：探針P1：線性方程F=72.404+6.95[BSA](10

5、-8 mol/L)，相關(guān)系數(shù)R=0.9876，檢出限為1.06 nmol/L；探針P2：線性方程F=26.367+12.861[BSA](10-8 mol/L)，相關(guān)系數(shù)R=0.9927，檢出限為0.42 nmol/L；探針P3：線性方程F=32.734+15.178[BSA](10-8 mol/L)，相關(guān)系數(shù)R=0.9931，檢出限為0.39 nmol/L，探針P4：線性方程F=66.434+35.024[BSA](10-8 mol/