蛋白質(zhì)與光譜探針的作用及其分析應(yīng)用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)光譜探針是20世紀50年代發(fā)展起來的測定蛋白質(zhì)的分析方法。借助于蛋白質(zhì)光譜探針可以測定微量的蛋白質(zhì)，并可以研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，研究蛋白質(zhì)與小分子配體的作用機理。它的主要特點是：操作方法較為簡便；靈敏度高；線性范圍寬；干擾物質(zhì)少；應(yīng)用范圍廣等，具有廣闊的發(fā)展前景?；诘鞍踪|(zhì)定量分析的研究現(xiàn)狀及本實驗室的研究基礎(chǔ)，本文做了以下幾個方面的工作： 1.概述了蛋白質(zhì)化學(xué)基礎(chǔ)，綜述了蛋白質(zhì)定量分析的一些主要方法及其在生物化學(xué)、

2、藥學(xué)、食品和臨床醫(yī)學(xué)等方面的應(yīng)用，引用文獻126篇。 2.尋找新的性能優(yōu)良的光譜探針 (1)染料探針：研究發(fā)現(xiàn)，變色酸2C在pH3.82的Britton-Robinson(B-R)緩沖介質(zhì)中，能與血清蛋白質(zhì)形成有色復(fù)合物，λmax為560nm，比試劑本身紅移約51nm，表觀摩爾吸光系數(shù)為3.05×105L/mol·cm(BSA)，線性范圍為20～80mg/L；偶氮胂羧在pH1.5的Clark-Lubs(C-L)緩沖介質(zhì)中

3、，能與多種蛋白質(zhì)在室溫下能迅速結(jié)合生成藍色復(fù)合物，λmax為612nm。線性范圍(HSA)為0～100mg/L，表觀摩爾吸光系數(shù)為2.67×105L/mol·cm。而且這兩種方法簡單，穩(wěn)定，線性范圍寬，對比度大，靈敏度高，能應(yīng)用于人血清中總蛋白質(zhì)的測定，因此，建立了以變色酸2C和偶氮胂羧為光譜探針光度法測定人血清蛋白質(zhì)的新方法。 (2)金屬絡(luò)合物光譜探針：研究表明，在pH2.0～2.4的酸性介質(zhì)中，Cu(Ⅱ)-AAⅢ絡(luò)合物與蛋白

4、質(zhì)發(fā)生作用，生成三元分子復(fù)合物。線性范圍為0～120mg/L，表觀摩爾吸光系數(shù)ε635=3.89×105L·mol-1·cm-1；在pH1.8～2.2的酸性介質(zhì)中，銅(Ⅱ)-硝基磺酚S絡(luò)合物與蛋白質(zhì)發(fā)生作用，導(dǎo)致絡(luò)合物溶液褪色，線性范圍為0～80mg/L，表觀摩爾吸光系數(shù)ε617=4.81×105L·mol-1·cm-1；在pH3.80～4.20的Clark-Lubs緩沖介質(zhì)中，Cu(Ⅱ)-ARS絡(luò)合物與蛋白質(zhì)作用，其吸收光譜發(fā)生大幅度

5、變化，生成的深紅色三元復(fù)合物，λmax為538m，比試劑本身紅移118nm，比絡(luò)合物λmax紅移30nm。線性范圍為0～300mg/L，表觀摩爾吸光系數(shù)ε538=2.37×105L·mol-1·cm-1(人血清白蛋白)。這些方法的靈敏度較大數(shù)直接以染料為光譜探針的光度法高，且生物體內(nèi)常見無機離子及有機物質(zhì)基本不干擾測定，直接應(yīng)用于人血清中蛋白質(zhì)總量的測定，結(jié)果滿意，因此建立了以絡(luò)合物為光譜探針分光光度法測定蛋白質(zhì)含量的新方法。