半導體量子點單克隆抗體熒光探針的制備及對細胞內蛋白質分子的檢測.pdf

1、目的：用最大發(fā)射波長分別605nm、525nm的半導體量子點(semiconductor quantum dots QDs)分別與Smad4、Smad2單克隆抗體偶聯(lián)后制備成水溶性的分子探針。并檢測兩種量子點在偶聯(lián)前的光學性質、對大鼠牙乳頭細胞(rat dental papillae cells，RDPCs)的生物相容性及偶聯(lián)后分子探針的光學性質和生物識別特異性。 方法：①選擇剛出生3天的新生SD大鼠，取出磨牙牙胚，分離牙乳頭，

2、用酶消化法培養(yǎng)SD大鼠牙乳頭細胞，用波形絲蛋白和細胞角蛋白免疫化學染色鑒定細胞來源，觀察細胞的生長規(guī)律；②把605QDs、525QDs及兩種量子點等濃度的混合物按3種不同濃度與RDPCs共同培養(yǎng)，觀察QDs對RDPCs生長和形態(tài)的影響；③用MTT法檢測不同濃度的605QDs、525QDs及兩種量子等濃度的混合物對RDPCs的毒性作用。④用化學偶連法制備水溶性的605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針并純化；⑤測定6

3、05QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針的吸收光譜、發(fā)射光譜并用激光共聚焦顯微鏡對605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針的光學性質進行檢測;⑥TGF-β1和大鼠牙乳頭細胞共同孵育24h后，采用SP免疫細胞化學法和605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針直接免疫熒光成像法觀察比較Smad4、Smad2在大鼠牙乳頭細胞內的分布，并檢測細胞內605QDs-Smad4、525QD

4、s-Smad2單抗熒光探針的光學性質。 結果：①：體外培養(yǎng)的RDPCs生長良好，波形絲蛋白染色陽性而細胞角蛋白染色陰性。②不同濃度的605QDs、525QDs及兩種量子點的等濃度混合物對體外培養(yǎng)的RDPCs沒有毒性作用，對其生長和形態(tài)也沒有影響。③605QDs、525QDs分別與Smad4、Smad2單抗通過共價結合形成穩(wěn)定的605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針，605QDs-Smad4、525QDs-

5、Smad2單抗熒光探針對大鼠牙乳頭細胞內Smad4分子仍具有特異性的識別能力；605QDs-Smad4、525QDs-Smad2單抗熒光探針仍具有QDs所具有的激發(fā)光譜寬，發(fā)射光譜窄，熒光度強，光化學穩(wěn)定性好等光學特征。 結論：①605QDs、525QDs及兩種量子點等濃度的混合物在一定的濃度范圍內對RPDCs具有良好的生物相容性，為605QDs、525QDs在活體生理條件下用于活細胞內的多通道信號研究提供了科學的證據。②生物修