混合抗原免疫結(jié)合蛋白質(zhì)芯片通量化制備單克隆抗體體系的初步建立.pdf

1、單克隆抗體具有高度的特異性及均一性，應(yīng)用廣泛，目前制備單克隆抗體的方法成本高，產(chǎn)量低，程序繁雜，周期長。近年來蛋白質(zhì)組學(xué)研究的迅速發(fā)展對高親和力的單克隆抗體的需求迅速增加，對傳統(tǒng)的雜交瘤技術(shù)提出了挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)芯片是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面行成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理以實現(xiàn)對生物分子的準卻、快速、大信息量的檢測。將單克隆抗體的特異性同蛋白質(zhì)芯片的高通量相結(jié)合是未來高通量制備單克隆抗體的趨勢。本實驗

2、的目的在于尋找高通量制備單克隆抗體的方法。 首先，用基因工程的方法分別在兩個表達載體構(gòu)建了4個蛋白的融合載體，并在大腸桿菌中進行表達，不同的載體蛋白帶有不同的標簽，分別用來免疫及篩選，解決了單抗篩選中抗標簽抗體的干擾；傳統(tǒng)方法在抗原免疫時采用一只小鼠一次免疫一種抗原，本實驗將4個純化后的蛋白同時免疫一只小鼠后用傳統(tǒng)方法制備單克隆抗體；對單抗進行Western bid及間接免疫熒光的驗證，同時進行了蛋白質(zhì)芯片的檢測，比較常規(guī)的EL

3、BA方法與蛋白質(zhì)芯片的吻合性。 結(jié)果顯示，8個融合蛋白在宿主菌中以包涵體的形式得到高表達；混合免疫小鼠后，通過一次細胞融合，用雜交瘤技術(shù)篩選得到了針對4個蛋白的24株單克隆抗體；并對24株抗體進行了Western bid及間接免疫熒光驗證，其中的7株能用于Western blot實驗，且具有良好的特異性，5株能用于間接免疫熒光實驗，識別胞漿內(nèi)蛋白；同時對24株單克隆抗體進行了蛋白質(zhì)芯片的檢測，共檢測了88個樣品，傳統(tǒng)的EMSA方