液體活檢在非小細(xì)胞肺癌中的臨床應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　肺癌是目前發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，而非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占到其中85％。此外，NSCLC的早期診斷和對患者轉(zhuǎn)移的預(yù)測以及肺部結(jié)節(jié)的鑒別診斷，目前都缺乏一個(gè)效能高、創(chuàng)傷小而又方便快捷的的臨床手段。新興的液體活檢，包括ctDNA、CTC和外泌體，由于其無創(chuàng)、簡便和可重復(fù)的優(yōu)勢，被越來越多的應(yīng)用到了各類腫瘤的臨床應(yīng)用中。但由于其方法缺乏統(tǒng)一性，目前在NSCLC中尚缺乏一個(gè)良好的液體活檢的技術(shù)指標(biāo)來完成上述亟待解決

2、的臨床需求。
　　本研究第一部分旨在探究作為液體活檢的CTC對肺部結(jié)節(jié)良惡性的鑒別診斷的能力，并與PET/CT進(jìn)行對比。第二部分探索了外泌體在肺腺癌的診斷和預(yù)測轉(zhuǎn)移的潛能，并進(jìn)行了外泌體與原發(fā)腫瘤蛋白表達(dá)及瘤負(fù)荷關(guān)系的探索性研究。通過這兩部分研究，本文希望對液體活檢在NSCLC中的臨床應(yīng)用潛能進(jìn)行較全面的探索和分析。
　　方法:
　　第一部分通過招募肺部結(jié)節(jié)患者，利用基于EpCAM特異性識別多肽的CTC捕獲分離技術(shù)，對

3、其進(jìn)行CTC檢測和計(jì)數(shù)。將CTC計(jì)數(shù)作為肺部結(jié)節(jié)良惡性的鑒別診斷指標(biāo)，進(jìn)行ROC曲線分析并確定其對肺部結(jié)節(jié)鑒別診斷的靈敏度與特異度，同時(shí)與PET/CT的鑒別診斷進(jìn)行對比。此外，按照胸部CT的影像特征對上述分析進(jìn)行進(jìn)一步的亞組分析，以確定該技術(shù)的CTC檢測技術(shù)最佳的應(yīng)用范圍。
　　第二部分則通過招募肺腺癌患者和健康受試者，利用基于醛基化乳膠微珠聯(lián)合流式細(xì)胞術(shù)的外泌體蛋白定量分析技術(shù)，對受試者外周血的外泌體進(jìn)行EGFR蛋白和CXCR4

4、蛋白的定量檢測。將外泌體EGFR蛋白表達(dá)量作為肺腺癌診斷指標(biāo)，進(jìn)行差異分析和ROC曲線分析，并確定其對肺癌診斷的靈敏度與特異度。另外，將外泌體CXCR4蛋白表達(dá)量作為肺腺癌轉(zhuǎn)移預(yù)測的指標(biāo)，進(jìn)行上述相同的分析，并探究其與肺腺癌侵襲性之間的相關(guān)性。最后通過將外泌體蛋白表達(dá)與腺癌組織免疫組化染色對比，以及患者術(shù)前術(shù)后外泌體蛋白表達(dá)對比，探究外泌體與原發(fā)腫瘤蛋白表達(dá)及瘤負(fù)荷關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　第一部分的研究納入了104例肺部結(jié)節(jié)

5、患者（97例肺腺癌、25例良性病變）。分析發(fā)現(xiàn)CTC計(jì)數(shù)在良惡性兩組間的差異有用統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為0.5個(gè)/mL和2.0個(gè)/mL(P＜0.05)。CTC計(jì)數(shù)鑒別診斷肺部結(jié)節(jié)良惡性的ROC曲線AUC為0.651(P＜0.05)，以＞0.5個(gè)/mL為閾值時(shí)，其靈敏度和特異度分別為45.6％和80.0％。亞組分析發(fā)現(xiàn)，CTC計(jì)數(shù)對于在CT影像中表現(xiàn)為純磨玻璃影(pGGO)結(jié)節(jié)具有良好的鑒別診斷效能:在良惡性兩組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中位數(shù)分別

6、為0個(gè)/mL和1.0個(gè)/mL(P＜0.01);而在pGGO組中鑒別診斷的ROC曲線AUC為0.863(P＜0.01)，以＞0個(gè)/mL為閾值時(shí)其鑒別診斷的靈敏度度和特異度分別為87.1％和83.3％。而通過與PET/CT進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)CTC計(jì)數(shù)對肺部結(jié)節(jié)的鑒別診斷在pGGO組顯著優(yōu)于PET/CT，后者的靈敏度和特異度僅為54.8％和66.7％，顯著低于CTC計(jì)數(shù)(P=0.039)。
　　第二部分的研究納入了68例受試者（38例肺腺癌、

7、30例健康受試者）。分析發(fā)現(xiàn)外泌體濃度、外泌體EGFR蛋白表達(dá)量在兩組人群沒有表現(xiàn)出差異。而外泌體CXCR4蛋白表達(dá)與肺腺癌侵襲性都顯著正相關(guān)，流式細(xì)胞分析中外泌體CXCR4熒光強(qiáng)度與與肺腺癌病理侵襲性評分的相關(guān)系數(shù)為0.413(P＜0.01)。此外，外泌體CXCR4蛋白表達(dá)量在轉(zhuǎn)移組和未轉(zhuǎn)移組間有顯著差異(P＜0.04)。通過ROC曲線分析，外泌體CXCR4蛋白表達(dá)率和外泌體CXCR4熒光強(qiáng)度預(yù)測肺腺癌轉(zhuǎn)移的AUC分別為0.697(P

8、=0.04)和0.770(P＜0.01);分別以＞7.4％和＞1429.39為閾值，外泌體CXCR4蛋白表達(dá)率和熒光強(qiáng)度預(yù)測肺癌轉(zhuǎn)移的靈敏度均為100％,而特異度分別為40.9％和59.1％。對比肺腺癌組織免疫組化染色和外泌體蛋白表達(dá)，沒有觀察到一致性。此外，患者術(shù)前和術(shù)后的外泌體相關(guān)指標(biāo)也沒有一致的變化趨勢，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)手術(shù)前后外泌體相關(guān)指標(biāo)變化沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　本研究通過對比CTC計(jì)數(shù)與PET/CT在肺部