正常腎組織蛋白質(zhì)組學(xué)分析及淀粉樣變性質(zhì)譜診斷分型研究.pdf

1、目的:基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已成為探索腎臟疾病發(fā)病機制及某些疑難腎臟疾病診斷的方法之一。目前利用激光顯微切割聯(lián)合質(zhì)譜(Laser microdissection and mass spectromy,LMD/MS)技術(shù)對人腎小球進行蛋白質(zhì)表達譜的研究有限，對腎髓質(zhì)進行蛋白質(zhì)組學(xué)表達譜的研究尚未見發(fā)表。采用LMD/MS技術(shù)不僅可分別獲取腎小球及腎髓質(zhì)組織以構(gòu)建蛋白表達譜，也可對腎病變組織區(qū)域進行分析。近年來，利用LMD/MS技術(shù)發(fā)現(xiàn)一些

2、新的淀粉樣變亞型，使得淀粉樣變分型診斷水平有所提高;同時對致淀粉樣變蛋白進行氨基酸序列分析有可能發(fā)現(xiàn)變異的致淀粉樣變蛋白。
　　方法:在第一部分工作中，收集6例癌旁腎組織，通過LMD/MS技術(shù)獲取腎小球及腎髓質(zhì)組織并構(gòu)建蛋白質(zhì)組表達譜;對兩個部位所鑒定到的蛋白進行生物信息學(xué)分析。在第二部分工作中，分析了近5年45例AL型淀粉樣變性病患者臨床、實驗室檢查及腎活檢病理結(jié)果，選取20例腎組織免疫熒光分型不明確的患者進行免疫組化及LMD/

3、MS分型，評價免疫組化及LMD/MS在免疫熒光分型不明確的AL淀粉樣變患者中的診斷意義。在第三部分工作中，對9例臨床、實驗室檢查及腎組織免疫化學(xué)檢查均不能分型的疑難腎淀粉樣變患者進行LMD/MS分析，以期達到腎淀粉樣變的完整分型診斷，并利用生物信息學(xué)方法對AA型淀粉樣變病例的SAA蛋白進行變異氨基酸序列分析。
　　結(jié)果:第一部分中，腎小球及腎髓質(zhì)分別鑒定到1373及1673種蛋白;與以往研究比較，本研究單獨鑒定到472種腎小球蛋白

4、，并首次建立了正常人類腎髓質(zhì)蛋白質(zhì)組表達譜。生物信息學(xué)分析顯示腎小球蛋白多為細胞骨架蛋白，腎髓質(zhì)蛋白多參與細胞代謝、具有酶解功能。第二部分中，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用免疫組化方法可對免疫熒光不能分型的部分AL型淀粉樣變進行分型診斷，敏感性約為55％;對于部分免疫組化方法不能分型的AL型淀粉樣變患者，LMD/MS技術(shù)仍可進行分型診斷;20例行LMD/MS分析的患者中，18例可明確分型診斷，敏感性為90％。第三部分中，9例疑難腎淀粉樣變分型不明確的患者，經(jīng)

5、LMD/MS診斷出4例AL型淀粉樣變，1例Apo AIV型淀粉樣變，1例AA型淀粉樣變及1例AH型淀粉樣變;AA型淀粉樣變患者淀粉樣物質(zhì)中包含SAA1及SAA2蛋白，未發(fā)現(xiàn)兩種蛋白的氨基酸序列變異。
　　結(jié)論:本研究利用LMD/MS技術(shù)，對新鮮冰凍腎組織顯微切割獲取的腎小球及腎髓質(zhì)組織進行蛋白質(zhì)組學(xué)及生物信息學(xué)分析，豐富了腎小球蛋白質(zhì)表達譜數(shù)據(jù)庫，并首次建立了正常人類腎髓質(zhì)蛋白質(zhì)組表達譜。免疫組化染色及LMD/MS分析發(fā)現(xiàn)，對于免