神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合GABA能神經(jīng)元移植治療大鼠海水浸泡腦損傷的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.探求單因素抑制Hes1基因表達(dá)對人GABA能神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo)分化率的影響，尋求一種簡單高效的誘導(dǎo)方法。
　　2.改進(jìn)海水浸泡腦損傷大鼠模型制作方法，以求更好的模擬海水浸泡腦損傷。
　　3.觀察海水浸泡腦損傷大鼠不同時間段腦內(nèi)炎癥表現(xiàn)，探尋細(xì)胞移植治療的適當(dāng)時間。
　　4.神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)聯(lián)合γ-氨基丁酸(GABA)能神經(jīng)元細(xì)胞聯(lián)合移植治療對海水浸泡腦損傷大鼠的神經(jīng)功能損傷的修復(fù)作用。
　

2、　方法：
　　在含有10％胎牛血清的普通分化培養(yǎng)基中添加寡核苷酸鏈“anti-hes1”組成誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，在相同條件下利用誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基和普通分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞分化為GABA能神經(jīng)元細(xì)胞，染色鑒定。
　　對外傷性腦損傷(TBI)大鼠模型的撞針進(jìn)行相應(yīng)改進(jìn)，通過灌腸袋定點滴注的方式模擬海水浸泡，觀察不同浸泡時間對大鼠損傷程度的影響。
　　按改良方法對大鼠進(jìn)行造模，造模成功后第24、48、72、96小時灌注取腦組

3、織并進(jìn)行常規(guī)HE染色及針對小膠質(zhì)細(xì)胞的DAB顯色。觀察局部組織的炎癥反應(yīng)及中樞系統(tǒng)免疫反應(yīng)中小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，聚集，分布變化。
　　將NSCs及其誘導(dǎo)的GABA能神經(jīng)元細(xì)胞在改良海水浸泡腦損傷大鼠模型建立后第4天通過立體定向的方式將其移植至大鼠腦內(nèi)，同樣造模及移植方法對模型大鼠進(jìn)行單純神經(jīng)干細(xì)胞移植，同時設(shè)置單純海水浸泡腦損傷組而不進(jìn)行細(xì)胞移植。觀察各組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)及腦組織切片中移植細(xì)胞的存活及分布情況。
　　結(jié)果：

4、>　　1.誘導(dǎo)第14天90％-95％細(xì)胞已完成分化。實驗組GABA分化率64.0％，對照組僅16.6％，統(tǒng)計學(xué)分析P＜0.01。
　　2.TBI大鼠模型海水浸泡30及45分鐘組存活率100％，60分鐘組存活率20％。神經(jīng)功能缺失3級以上，模型45分鐘組為80％，明顯高于其他兩組。
　　3.大鼠腦損傷后48-72小時：出血，水腫加重;小膠質(zhì)細(xì)胞聚集，活化，其數(shù)量較其他時段明顯增高，并有明顯的吞噬行為。72-96小時腦出血及水腫

5、情況逐漸穩(wěn)定，小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少。
　　4.細(xì)胞治療組神經(jīng)功能較單純損傷組均有明顯改善。聯(lián)合治療組與神經(jīng)干細(xì)胞治療組相比，在第14-31天神經(jīng)功能評分(mNSS)優(yōu)于神經(jīng)干細(xì)胞治療組(P＜0.05)，在第21天偏癱實驗(LUA)結(jié)果優(yōu)于神經(jīng)干細(xì)胞治療組(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.抑制Hes1基因的表達(dá)可顯著提高人NSCs誘導(dǎo)分化為GABA能神經(jīng)元的分化率。
　　2.改良海水浸泡腦損傷大鼠模型可以較好模