大鼠腦內(nèi)注射Aβ1-42后PPARγ與炎癥因子表達相關(guān)性及積雪草苷干預研究.pdf

1、目的:過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activatedreceptor，PPAR)參與了體內(nèi)脂代謝、糖穩(wěn)態(tài)、炎癥反應(yīng)、凋亡等多種生理反應(yīng)，PPAR表達或激活在神經(jīng)元退變病變中也發(fā)揮重要的保護作用。本研究通過觀察在大鼠腦內(nèi)注射β淀粉樣蛋白1-42(β-amyloid1-42，Aβ1-42)后PPARγ及炎癥因子表達情況以及大鼠行為學改變，分析PPARγ與炎癥因子表達與大鼠空間記憶能力相關(guān)性。同

2、時給予積雪草苷干預，觀察積雪草苷對大鼠腦內(nèi)注射Aβ1-42后大鼠行為學改變以及PPARγ與炎癥因子表達影響，探索積雪草苷防治AD疾病研究的新的作用機制。
　　方法:(1)分組與給藥:70只SD大鼠隨機分為陰性對照組、模型組，假手術(shù)對照組，陽性對照組，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組。模型制作方法為將β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)10μg(1μL)注入大鼠雙側(cè)海馬CA1區(qū)。積雪草苷組造模前2小時第一次灌胃給藥

3、，假手術(shù)對照組和模型組灌胃等體積生理鹽水，陽性對照組給予多奈哌齊1mg/kg。每天上午灌胃給藥1次，連續(xù)2周。
　　(2)大鼠空間學習記憶能力檢測:通過Morris水迷宮法進行大鼠定位航行試驗與空間搜索實驗，檢測大鼠空間學習記憶能力。大鼠在造模第2周后進行檢測。1.定位航行實驗:第一天大鼠自由游泳2分鐘，第二天起每天一次，每次四個象限各訓練1次，取平均值，連續(xù)4d，記錄大鼠尋找并爬上平臺所需時間（逃避潛伏期）;2.空間搜索實驗:第

4、5天撤除平臺，記錄2 min內(nèi)大鼠跨過平臺相應(yīng)位置的次數(shù)。(3)免疫組化檢測海馬組織Aβ1-42表達:大鼠處死后取海馬組織制成石蠟切片。常規(guī)脫蠟，通過免疫組化法觀察Aβ1-42表達情況。軟件image-pro plus6.0測量圖片上黃色部分的累積光密度(IOD)，比較各組IOD值。(4)ELISA法檢測海馬組織IL-6，TNF-α，IL-1:處死大鼠后冰上取出右側(cè)海馬，檢測海馬組織中IL-6，TNF-α，IL-1表達情況。(5)wes

5、tern-blot檢測PPARγ蛋白表達:以β-actin為內(nèi)參，通過免疫印跡法檢測PPARγ蛋白表達量，蛋白條帶吸光度值用Image pro-plus軟件測定。(6)統(tǒng)計學方法:計量資料采用(X)±S表示，數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析，兩組間比較采用SNK法。P＜0.05表示有統(tǒng)計學差異。統(tǒng)計學數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件分析處理。
　　結(jié)果:(1)積雪草苷對大鼠空間學習記憶能力影響:與模型組比較，假手術(shù)對照組大鼠平均潛伏期明顯縮短

6、，跨越平臺次數(shù)明顯增加(P＜0.01);陽性對照組平均潛伏期明顯縮短，跨越平臺次數(shù)明顯增加(P＜0.01);積雪草苷5mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組大鼠平均潛伏期縮短，跨越平臺次數(shù)增加(P＜0.05)。與陽性對照組比較，積雪草苷5mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組大鼠平均潛伏期與跨越平臺次數(shù)無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(2)積雪草苷對大鼠海馬組織Aβ1-42表達影響:模型組大鼠海馬區(qū)可見Aβ1-42表達較多，假

7、手術(shù)對照組幾乎沒有Aβ1-42表達，陽性對照組，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可見少量Aβ1-42表達。與模型組比較，假手術(shù)對照組和陽性對照組，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。(3)大鼠海馬組織PPARγ蛋白表達及積雪草苷對PPARγ蛋白影響:模型組海馬組織PPARγ蛋白表達增加，假手術(shù)對照組PPARγ蛋白表達較少，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.

8、05)。積雪草苷5mg/kg組對PPARγ蛋白表達無明顯影響，比較無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，積雪草苷15mg/kg，45mg/kg組可上調(diào)PPARγ蛋白表達，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(4)積雪草苷對大鼠海馬組織IL-6表達影響:與模型組比較，假手術(shù)對照組IL-6表達較低，有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。與模型組比較，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可減少Aβ1-42刺激后海馬組織IL-6含

9、量，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。(5)積雪草苷對大鼠海馬組織TNF-α表達影響:與模型組比較，假手術(shù)對照組TNF-α表達較低，有顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。與模型組比較，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可減少Aβ1-42刺激后海馬組織TNF-α含量，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。(6)積雪草苷對大鼠海馬組織IL-1表達影響:與模型組比較，假手術(shù)對照組IL-1表達較低，有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。與模型

10、組比較，積雪草苷5 mg/kg，15mg/kg，45mg/kg組可減少Aβ1-42刺激后海馬組織IL-1含量，有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)大鼠腦內(nèi)注射Aβ1-42后大鼠空間學習記憶能力下降，PPARγ蛋白表達增加，炎癥因子IL-6，TNF-α，IL-1表達增加，提示大鼠空間學習記憶能力下降可能與PPARγ蛋白表達增加，炎癥因子IL-6，TNF-α，IL-1表達增加有關(guān)。(2)積雪草苷能夠提高上調(diào)PPARγ蛋白表