積雪草苷的提取、分離純化與水解.pdf

1、積雪草(Centella asiatica(L.) Urban)作為一種傳統(tǒng)藥材，應(yīng)用歷史悠久，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明積雪草可用于燒傷、抑郁癥、胃潰瘍等相關(guān)疾病的治療。積雪草中起作用的藥理成分主要是皂苷及其皂苷元類，包括積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草苷和羥基積雪草酸等，因此這些物質(zhì)提取和純化一直是積雪草研究的重點(diǎn)。近幾年來的研究表明，以積雪草酸和羥基積雪草酸等苷元出發(fā)，合成的一系列苷元衍生物的藥理作用明顯優(yōu)于其原始皂苷，可大大提高積雪草酸、羥

2、基積雪草酸等苷元的利用率。但是由于種種原因，這些活性成分的提取率始終不高，從而造成相關(guān)產(chǎn)品價(jià)格不菲，限制了積雪草產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用。因此，研究積雪草苷的提取、分離純化及水解，有利于高值化利用積雪草資源。
　　 針對以上情況，本文系統(tǒng)地介紹了積雪草中的活性成分利用現(xiàn)狀，并綜述了積雪草中活性物質(zhì)的提取、純化及分析方法的研究進(jìn)展。本課題以積雪草為研究對象，對其活性成分積雪草苷和羥基積雪草苷的提取純化方法進(jìn)行了研究，并對從積雪草苷類活性物

3、質(zhì)出發(fā)制備積雪草酸以及羥基積雪草酸的工藝進(jìn)行了探索，建立了一條關(guān)于積雪苷的提取、分離和水解制備積雪草酸和羥基積雪草酸的新工藝。主要內(nèi)容如下。
　　 1．積雪草中積雪草總苷提取工藝研究
　　 探明了比色法測定積雪草總苷含量的顯色反應(yīng)條件，該條件下反應(yīng)體系穩(wěn)定，2h內(nèi)吸光度基本不變，以羥基積雪草苷為對照品、利用該顯色條件測定積雪草總苷含量的方法線性關(guān)系良好，檢測范圍較廣。最佳顯色反應(yīng)條件為：香草醛濃度為5％、高氯酸用量0.8

4、mL、反應(yīng)溫度為60℃、反應(yīng)時(shí)間為15min。
　　 利用單因素及正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了浸漬法提取積雪草總苷的提取工藝，確定了最佳提取工藝條件：以70%乙醇水溶液為溶劑，料液比為1：10，室溫下提取3次，每次提取時(shí)間為4h。
　　 研究了積雪草中積雪草苷的富集部位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)積雪草苷主要富集于積雪草的葉片中，積雪草總苷的含量高達(dá)6.12%，而莖部為2.43%，根部含量較低，僅含1.11%。
　　 2．大孔吸附樹脂純化積雪草

5、苷和羥基積雪草苷的工藝研究
　　 通過大孔吸附樹脂對積雪草苷和羥基積雪草苷兩種皂苷的吸附和解吸性能以及吸附動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，對HPD100、HPD300、X-5、D101和AB-8等5種大孔吸附樹脂進(jìn)行了篩選，并對最優(yōu)樹脂進(jìn)行了吸附等溫線進(jìn)行了考察，用Langmuir和Freundlich方程對結(jié)果進(jìn)行了擬合，最后通過動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，建立了大孔吸附樹脂純化積雪草苷和羥基積雪草苷的工藝。工藝條件為：樹脂HPD100為吸附劑，50%的乙醇水

6、溶液為解吸劑，吸附上樣流速為2BV/h，動(dòng)態(tài)解吸流速為2BVh，積雪草苷通過梯度洗脫后（洗脫液濃度10～50%的范圍內(nèi)），回收率可達(dá)72.0%，含量從上樣前的2.0%提高到21.5%；羥基積雪草苷回收率可達(dá)70.4%，含量由上樣前的3.9%提高到39.7%（洗脫液濃度10～50%的范圍內(nèi)），可以有效達(dá)到富集和純化積雪草苷和羥基積雪草苷的目的。3．積雪草苷的水解工藝研究
　　 建立了一種同時(shí)分析測定積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草酸

7、和羥基積雪草酸的HPLC法，該方法線性關(guān)系良好，穩(wěn)定性強(qiáng)，精密度較高，適用檢測范圍較廣。色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm，Agilent）；采用動(dòng)態(tài)洗脫，流速為0.6mL/min;柱溫為35℃；檢測波長為210nm。此條件下積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草苷、羥基積雪草酸精密度的RSD分別為0.35%、0.24%、0.17%、0.18%，穩(wěn)定性的RSD分別為0.54%、0.46%、0.44%

8、、0.35%，平均加樣回收率分別為101.09%、99.57%、100.86%、99.99%，均符合我國藥典對藥物分析的要求?？梢詰?yīng)用于積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草酸的含量測定。
　　 研究了積雪草苷和羥基積雪草苷的水解工藝。通過對催化劑、反應(yīng)溶劑、皂苷初始濃度、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度對水解的影響研究發(fā)現(xiàn)：最適于積雪草苷的水解的為強(qiáng)堿NaOH;反應(yīng)溶劑為50%的乙醇水溶液；在本實(shí)驗(yàn)所選擇的皂苷濃度范圍內(nèi)（積雪草苷0.

9、22～1.10mg/mL;羥基積雪草苷0.40～1.20mg/mL）水解反應(yīng)的變化不明顯；隨著反應(yīng)溫度的升高，皂苷水解的反應(yīng)速率明顯增加，并且在實(shí)驗(yàn)溫度范圍內(nèi)羥基積雪草苷的水解快于同等條件下積雪草苷的水解。用Arrhenius方程對兩種皂苷的水解過程進(jìn)行擬合，表明積雪草苷和羥基積雪草苷的水解過程符合一級反應(yīng)，其反應(yīng)活化能分別為70.1kJ/mol和83.3kJ/mol。
　　 通過以上研究，本文建立了一套完整的包括從積雪草原草出