積雪草對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎組織MMP-9-TIMP-1表達的實驗研究.pdf

1、背景:慢性腎臟病（CKD）的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，但其發(fā)生發(fā)展的機制尚不完全清楚。許多研究表明，腎小管間質(zhì)纖維化是多數(shù)慢性腎臟病進展至終末期腎?。‥SRD）的最終病理過程。目前的研究表明，諸多因子的過度表達和分子機制參與了腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展，其中包括基質(zhì)金屬蛋白酶系統(tǒng)(M-MPs/TIMPs)失衡。現(xiàn)已有相關(guān)研究證明積雪草能夠明顯改善慢性腎臟病患者的癥狀及保護腎功能。因此，研究和探討積雪草保護腎功能治療慢性腎臟病的相關(guān)機制具有重

2、要意義。
　　目的:通過觀察積雪草對大鼠單側(cè)輸尿管梗阻后腎功能和MMPs/TIMPs的影響，初步探討積雪草抑制單側(cè)輸尿管梗阻后腎小管間質(zhì)纖維化的分子生物學(xué)機制，從而為積雪草的臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)實驗依據(jù)。
　　方法：采用結(jié)扎雄性 SD大鼠左側(cè)輸尿管的方法制作腎小管間質(zhì)纖維化模型。積雪草給藥劑量分別為5.6mg/100g/day、11.2mg/100g/day和16.8mg/100g/day；福辛普利（蒙諾）給藥劑量為1.67m

3、g/100g/day；假手術(shù)組和模型組給予相同體積蒸餾水灌胃，治療21天。分別在單側(cè)輸尿管梗阻后14天和21天確定積雪草和福辛普利（蒙諾）對腎功能和MMP-9/TIMP-1的影響，具體指標測定方法如下：①腹主動脈采血檢測肝腎功能，留取24h尿液測總蛋白含量；②采用免疫組化法對腎臟組織中MMP-9/TIMP-1進行定性及定量分析；③利用 Western blot確定腎臟組織中MMP-9/TIMP-1的蛋白表達量。
　　結(jié)果：

4、　?。?）大鼠單側(cè)輸尿管梗阻后情況：14天、21天模型組因出血、感染各死亡1只；治療組及模型組術(shù)后7天傷口愈合，生長發(fā)育正常、毛粗、光澤度和活動度均稍有下降；
　?。?）單側(cè)輸尿管梗阻后各組大鼠肝腎功能、24h尿蛋白定量均為陰性，與假手術(shù)組相比，無統(tǒng)計學(xué)意義；
　?。?）免疫組化方法檢測單側(cè)輸尿管梗阻后大鼠腎臟組織中MMP-9、TIMP-1的定性及定量分析結(jié)果：①大鼠腎臟組織中MMP-9免疫組化染色結(jié)果：假手術(shù)組大鼠腎組織可

5、見少量棕黃色染色，呈弱陽性表達，該蛋白以腎小管的上皮細胞胞漿表達為主，胞核、腎小球內(nèi)皮細胞有弱陽性表達，而腎間質(zhì)中無或極少表達。在 UUO術(shù)后14天和21天時，與模型組比較，積雪草小劑量、積雪草中劑量、積雪草大劑量組能明顯能增加 MMP-9的產(chǎn)生，該作用呈劑量依賴性。②大鼠腎臟組織中TIMP-1免疫組化染色結(jié)果：腎臟組織中TIMP-1的表達：假手術(shù)組大鼠腎組織可見少量棕黃色染色，呈弱陽性表達，該蛋白以腎小管的上皮細胞胞漿表達為主，腎小球

6、內(nèi)皮細胞及血管內(nèi)皮細胞均有弱陽性表達，而腎間質(zhì)中無或極少表達。在 UUO術(shù)后14天和21天時，與模型組比較，積雪草小劑量、積雪草中劑量、積雪草大劑量組能明顯能抑制 TIMP-1的產(chǎn)生，該作用呈劑量依賴性；
　?。?）單側(cè)輸尿管梗阻后大鼠腎組織中MMP-9/TIMP-1蛋白表達量的影響：UUO術(shù)后14天和21天時，與模型組比較，積雪草小劑量、積雪草中劑量、積雪草大劑量組能明顯能明顯升高腎臟組織中MMP-9的蛋白表達量，降低腎臟組織中