銀杏葉片對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響.pdf

1、目的：本文旨在探討銀杏葉片對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型(UUO)腎間質(zhì)纖維化的影響及其可能的作用機(jī)制，并觀察腎組織中轉(zhuǎn)移生長因子(TGF-β1)、核轉(zhuǎn)錄因子(NF-□B)、平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的變化)。 方法：75只清潔級大鼠，用單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)模型，隨機(jī)分成五組：A組為假手術(shù)組、B組為模型組、C組為依那普利組、D組為銀杏葉組、E組為依那普利加銀杏葉組，每組15只，術(shù)后第3、7和14天分三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動物中的5只

2、，行HE、MASSON染色動態(tài)觀察梗阻側(cè)腎組織病理學(xué)的改變，用免疫組織化學(xué)的方法檢測腎組織中TGF-β1、NF-κB、α-SMA的表達(dá)進(jìn)行病理圖象分析，計(jì)算陽性面積比率， 用氯胺T法測定腎組織中羥脯氨酸的含量，然后根據(jù)公式換算出腎間質(zhì)膠原蛋白的含量，計(jì)算出膠原蛋白(ug)/腎重(mg)之比。 結(jié)果：1.腎組織病理學(xué)改變：光鏡下通過HE.、Masson染色觀察A組從第3天到第14天腎組織未見明顯病理改變。B組光鏡下術(shù)后第3

3、天開始出現(xiàn)腎間質(zhì)水腫，單核細(xì)胞浸潤，遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞扁平、腎間質(zhì)增寬，失去“背靠背”的特征，腎小球結(jié)構(gòu)未見明顯異常；術(shù)后第7天腎小管明顯擴(kuò)張，腎間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤，管腔內(nèi)可見脫落的上皮細(xì)胞，偶見萎縮的腎小管；術(shù)后第14天梗阻側(cè)腎臟肉眼觀察：腎臟體積增大，顏色灰白，內(nèi)有渾濁的尿液，腎皮質(zhì)變薄，腎小管上皮細(xì)胞彌漫空泡變性，多數(shù)腎小管擴(kuò)張，腎間質(zhì)彌漫的單核，淋巴細(xì)胞浸潤和間質(zhì)纖維化，Masson染色可見皮質(zhì)及外髓萎縮腎小管較多，間質(zhì)纖維化較

4、明顯，偶見腎小球硬化。各治療組(C、、D、E組)大鼠第3天腎小管間質(zhì)病變與模型組無明顯改變；到術(shù)后第7天治療組大鼠腎小管間質(zhì)病變較模型組均有不同程度減輕：表現(xiàn)為梗阻側(cè)腎間質(zhì)水腫減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少。至用藥第14天各組與B組比較腎小管上皮細(xì)胞病變減輕，炎性細(xì)胞浸潤減少，間質(zhì)纖維化減輕，E組比C.D組變化明顯，而C、D兩組間病理改變無明顯差別。2.①腎組織核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)的免疫組織化學(xué)結(jié)果：A組大鼠腎組織中僅見腎小球系膜細(xì)胞和小管

5、上皮細(xì)胞表達(dá)較弱的NF-κB(0.32±0.12)％。與A組比較B組從第3天起大鼠腎間質(zhì)和細(xì)胞胞漿中NF-κB表達(dá)已明顯增加(12.17±0.35)％，同時(shí)部分腎小管上皮細(xì)胞也呈陽性著色，與A組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.01)，隨著時(shí)間的進(jìn)展第7天至14天NF-κB表達(dá)達(dá)到高峰(14.36±1.20)％，與A組同一時(shí)間比明顯增加，(P＜0.01)，治療組(C.D.E組)從用藥第3天可明顯降低NF-κB的表達(dá)，到用藥14天(C.D.E組

6、)陽性面積分別為(9.43±0.37)％、(9.28±0.61)％、(8.13±0.14)％，與B組同一時(shí)間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且E組降低NF-κB表達(dá)最明顯與C、D組同一時(shí)間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，D組銀杏葉組雖然比C組依那普利組降低NF-κ表達(dá)明顯但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。2.②TGF-β1免疫組織化學(xué)結(jié)果：A組皮髓交界處腎小管上皮細(xì)胞胞漿中有少量TGF-β1表達(dá)，腎小球和腎間質(zhì)細(xì)胞少見表達(dá)，陽性

7、面積為(2.76±1.30)％；B組從第3天起大鼠腎間質(zhì)和細(xì)胞胞漿中有TGF-β1，同時(shí)部分腎小管上皮細(xì)胞也有表達(dá)，陽性面積為(6.91±2.07)％，隨著時(shí)間的進(jìn)展從第7天(10.57±1.66)％，至14天TGF-β1表達(dá)達(dá)到高峰(16.74±2.18)％，TGF-β1主要在萎縮和擴(kuò)張的腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)，與A組比較有明顯的差異(P＜0.01)，用藥3天后治療組(C.D.E組)陽性面積分別為(4.95±2.59)％、(5.59±2.

8、53)％、(4.77±0.99)％與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。隨著用藥時(shí)間的延長從第7天至14天治療組(C.D.E組)可明顯降低TGF-β1的表達(dá)，與B組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，其中E組腎組織中TGF-β1陽性表達(dá)面積最低(9.74±1.06)％，C組與D組間相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。2.③腎組織平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的免疫組織化學(xué)結(jié)果：A組大鼠腎組織中α-SMA只在正常腎組織的血管壁表達(dá)，腎小球和

9、腎小管中無表達(dá)，腎間質(zhì)中只有極少量的α-SMA表達(dá)。從第3天起B(yǎng)組模型組大鼠除血管壁外，可見大量α-SMA表達(dá)于腎間質(zhì)細(xì)胞胞漿中，同時(shí)部分小管上皮細(xì)胞胞漿也有陽性著色，隨時(shí)間的進(jìn)展到14天達(dá)到高峰(11.21±0.73)％，與A組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.01)，從用藥第3天后治療組(C.D.E組)陽性面積分別為(6.53±0.85)％、(6.57±1.01)％、(6.50±0.85)％，與B組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)

10、，C.E兩組用藥第7天后就明顯抑制了α-SMA上升趨勢，到第14天達(dá)到抑制高峰分別為(9.81±0.47)％、(8.32±0.80)％，與B組同一時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05)，其中E組腎組織中α-SMA陽性表達(dá)面積所占的百分比最低，D組銀杏葉組用藥后雖然能夠延緩α-SMA上升趨勢，但各時(shí)間點(diǎn)與B組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。3.銀杏葉片對腎組織膠原蛋白含量的影響：A組假手術(shù)組每毫克腎組織內(nèi)含膠原為32.98±12.

11、85ug；B組術(shù)后第3天腎皮質(zhì)中膠原蛋白含量明顯升高，第7天其含量升高4倍(135.60±19.83ug)，14天后5.6倍(180.40±22.95ug)與A組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.01)。治療組(C、D、E組)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)腎組織膠原蛋白含量與模型組比較均有不同程度下降，到14天分別為(114.56±32.07)ug、115.94±24.14ug、108.21±29.84ug，與B組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜0.05，其中E組腎組

12、織中的膠原蛋白含量減少最明顯，C組依那普利組次之，銀杏葉組最差，而三組間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＞0.05)。 結(jié)論：銀杏葉片能夠減少UUO大鼠腎間質(zhì)炎性細(xì)胞的浸潤，減少腎間質(zhì)膠原蛋白的含量，有防治UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的作用，可能機(jī)制是通過抗氧化應(yīng)激來抑制NF-κB的活性，從而下調(diào)TGF-β1的表達(dá)，使細(xì)胞外基質(zhì)合成減少來防治UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化。與依那普利比較，銀杏葉在防治UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的作用無明顯差別，銀杏葉和依那