沙利度胺和人間充質(zhì)干細(xì)胞對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化的作用.pdf

1、目的:通過體內(nèi)試驗(yàn)探討沙利度胺和人間充質(zhì)干細(xì)胞對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及機(jī)制。
　　 方法:(1)40只雌性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組),模型組(UUO組),沙利度胺治療組(Thalidomide,200mg/kg/d,Thd組)和洛丁新治療組(Lotensin,10mg/kg/d,Lot組)(每組n=10只)。治療組于手術(shù)日起分別予沙利度胺、洛丁新灌胃,每日1次,直至處死動(dòng)物；模型組和假手術(shù)組給予等量溶

2、媒生理鹽水灌胃。術(shù)后第7天、第14天采血檢測腎功能后,取腎組織,分別行HE和Masson染色了解腎間質(zhì)纖維化病變,免疫組織化學(xué)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測缺氧誘導(dǎo)因子1-α(HIF-1α)、Ⅰ型膠原(ColⅠ)及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)在腎組織的表達(dá)。(2)從人骨髓中分離培養(yǎng)MSCs,經(jīng)流式細(xì)胞分析(FCM)鑒定、檢測HMSCs純度并傳代培養(yǎng)。36只雌性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組),模型組(UUO組)和HM

3、SCs治療組,每組12只。建立UUO大鼠模型,HMSCs治療組于術(shù)后即刻及術(shù)后一周經(jīng)尾靜脈注射細(xì)胞濃度為1×107/0.5ml的HMSCs1×107,Sham組及模型組于術(shù)后即刻及術(shù)后一周經(jīng)尾靜脈注射等體積溶媒即不含血清的DMEM-LG培養(yǎng)液。于術(shù)后1月、2月每組取大鼠6只,檢測腎功能、血漿白蛋白,取腎組織行HE、Masson染色檢測腎間質(zhì)纖維化病變,免疫組化及RT-PCR檢測HIF-1α、ColⅠ、α-SMA在腎組織的表達(dá)。
　

4、　 結(jié)果:(1)UUO組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平均高于Sham組(P<0.05)。Thd組、Lot組BUN和Scr水平較UUO組明顯下降,但仍高于Sham組(P<0.05),Thd組和Lot組組間無差異(P>0.05)。(2)Sham組腎臟病理無明顯改變；UUO組、Thd組和Lot組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)腎間質(zhì)損害,UUO組比Thd組和Lot組嚴(yán)重(P<0.05),Thd組和Lot組組間無明顯差異(P>0.05)

5、。(3)免疫組化和RT-PCR均顯示Sham組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α、ColⅠ均為少量表達(dá),α-SMA無表達(dá)；UUO組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α、ColⅠ、α-SMA表達(dá)水平均較Sham組明顯增加；Thd組和Lot組ColⅠ、α-SMA表達(dá)水平均低于UUO組(P<0.05),但仍高于Sham組(P<0.05)；Thd組HIF-1α水平低于UUO組(P<0.05),Lot組HIF-1α水平與UUO組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。(4)

6、術(shù)后1月、2月HMSCs組BUN和Scr水平均明顯高于Sham組,顯著低于UUO組。(5)Sham組腎臟病理無明顯改變。UUO組、HMSCs組出現(xiàn)腎間質(zhì)損害(P<0.05),但兩組間無明顯差異。(6)免疫組化和RT-PCR均顯示HMSCs組HIF-1α、α-SMA表達(dá)水平均低于UUO組(P<0.05),但仍高于Sham組(P<0.05)；ColⅠ表達(dá)水平低于UUO組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:Thd可在一