不同劑量氯沙坦對大鼠單側(cè)輸尿管梗阻模型腎臟間質(zhì)纖維化的影響.pdf

1、[背景與目的] 腎間質(zhì)纖維化是各種進(jìn)展性腎臟疾病的病理變化特征，是導(dǎo)致終末期腎功能衰竭的最終共同通道。腎小管間質(zhì)纖維化表現(xiàn)為腎小管萎縮、腎間質(zhì)淋巴單核細(xì)胞浸潤和纖維化，是反映腎功能下降嚴(yán)重程度和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。早期腎間質(zhì)纖維化可以完全逆轉(zhuǎn)，研究腎小管間質(zhì)纖維化對于揭示慢性腎功能衰竭的機(jī)制有重要意義。腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，目前尚未完全闡明，在眾多的促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化的因子中，單核細(xì)胞趨化蛋白monoeytechemoa

2、ttractantprotein(MCP1)、轉(zhuǎn)化生長因子transforminggrowthfactor(TGF)-β1mRNA和血管緊張素II(AngII)等的作用越來越得到重視。氯沙坦是一種AngII受體拮抗劑(angiotensinreceptorblockade，ARB)，對AT1受體具有高度選擇性，在受體水平特異性地拮抗循環(huán)或局部組織的AngII。氯沙坦能降低體循環(huán)和腎小球毛細(xì)血管內(nèi)壓力、改善高血壓的血流動力學(xué)，減少血流剪切

3、力(SS)引起的TGF—β1表達(dá)增強(qiáng)，減少AngII介導(dǎo)的TGF—β1生成增加，減少腎組織中MCP1的表達(dá)從而減少巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的浸潤，減少ECM的沉積等，改善炎癥狀態(tài)，延緩腎間質(zhì)纖維化。ARB通過降低腎小球毛細(xì)血管跨膜壓及直接減小毛細(xì)血管內(nèi)皮的窗孔降低濾過膜的通透性，從而減少尿蛋白，減輕腎間質(zhì)纖維化。ARB直接對炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響，是該類藥物具有抗炎和抗纖維化的重要作用途徑。20世紀(jì)80年代，大量動物實驗表明阻斷RAS系統(tǒng)可

4、以減輕腎間質(zhì)纖維化。近十年許多大型臨床試驗從循證醫(yī)學(xué)的角度也表明了阻斷RAS系統(tǒng)可以延緩腎功能衰竭的發(fā)展，但是選用常規(guī)劑量ACEI或ARB并不能完全阻止所有患者腎功能的惡化，一部分病人將不可避免地進(jìn)入終末期腎病。已有資料表明，阻斷RAS系統(tǒng)的強(qiáng)度即使用大劑量ACEI或ARB可以更好地起到腎保護(hù)作用，氯沙坦和其他ARB一樣在保護(hù)腎功能方面，其重要的作用還在于其獨立于降壓作用之外的非血流動力學(xué)效應(yīng)，如通過多種途徑減輕腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生和發(fā)展

5、。而且其中一些實驗顯示ARB的作用和劑量有關(guān)，探討腎保護(hù)的合適劑量及常規(guī)劑量、大劑量和超大劑量ARB的作用差異的機(jī)制成為當(dāng)前腎臟病學(xué)研究的熱點。為此，本實驗以單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)大鼠模型為研究對象，初步探討大劑量及超大劑量氯沙坦能否優(yōu)于常規(guī)劑量，起到更多的腎臟保護(hù)作用，為臨床開辟新思路。 [方法] 選擇清潔級健康雄性Sprague—Dawley大鼠90只，體重180～200g，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組18只、UUO組1

6、8只、常規(guī)劑量氯沙坦組(50mg/kg/d)(L50)18只、大劑量氯沙坦組(200mg/kg/d)(L200)18只、超大劑量氯沙坦組(500mg/kg/d)(L500)18只。麻醉后打開腹腔，雙結(jié)扎左側(cè)輸尿管；假手術(shù)組大鼠只打開腹腔不結(jié)扎輸尿管。各藥物治療組均于術(shù)后第三天開始用相應(yīng)藥物等量灌胃。假手術(shù)組和UUO組以等量生理鹽水灌胃。術(shù)后第7、14和21天測鼠尾動脈血壓，處死前一天單只置于代謝籠內(nèi)收集24h尿液。每組各殺6只，開胸心臟

7、取血作血清生化檢查。取左側(cè)部分腎組織于4％多聚甲醛固定，石蠟包埋；其余腎組織液氮冷凍，-80℃保存，待行RT—PCR。24小時尿蛋白(Upro)采用全自動生化儀測定。鼠尾袖帶血壓(TCP)采用RBP—1B測壓系統(tǒng)，測量大鼠在安靜、清醒狀態(tài)下的尾動脈壓，測定3次，取其平均值。開胸心臟取血，采用美國強(qiáng)生公司VITROS950干化學(xué)分析儀作血清生化檢查。石蠟切片行HE、Masson染色，動態(tài)觀察腎臟病理學(xué)變化，評定各組大鼠腎小管損害百分比、腎

8、間質(zhì)纖維化程度。免疫組化法測定腎間質(zhì)中MCP—1的變化，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析結(jié)果。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)檢測腎臟MCP-1、TGF—β1mRNA的變化。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料以-x±s表示，均數(shù)的多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 [結(jié)果] 隨著梗阻時間延長，各時間點UUO組血壓較其余各組顯著升高(P<0.05)，三治療

9、組與假手術(shù)組之間差異無顯著性(P>0.05)。 各時間點血清BUN、SCR、血鉀測定，三治療組與假手術(shù)組、UUO組之間差異無顯著性(P>0.05)。 早期各組24小時尿蛋白無顯著差異，隨著梗阻時間的延長，UUO組24hUpro較其余各組顯著增多(P<0.05)，術(shù)后第21天，L200組較L50組尿蛋白排泄顯著減少(P<0.05)，L500組較L200組尿蛋白排泄顯著減少(P<0.05)。 光鏡下觀察，HE及Mas

10、son染色Sham組未見異常。各組各時間點大鼠腎臟腎小球均無明顯病理改變。UUO模型早期腎小管擴(kuò)張不明顯，可見腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞局灶浸潤，腎間質(zhì)寬度增加；第7天腎小管明顯擴(kuò)張，上皮細(xì)胞變性、水腫、甚至壞死，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤增多，間質(zhì)寬度明顯增加，偶見萎縮腎小管；第14天上述病變加重，可見彌漫的腎小管基底膜增厚皺縮，小管基底膜不同程度斷裂，皮質(zhì)及外髓萎縮的腎小管較多，間質(zhì)中大量淋巴單核細(xì)胞浸潤，纖維化較明顯。第21天大量腎小管上皮細(xì)胞壞死萎

11、縮，彌漫的單核、淋巴細(xì)胞浸潤、大量成纖維細(xì)胞增生及膠原纖維化形成。Masson染色可見UUO組術(shù)后7天腎小管擴(kuò)張，腎間質(zhì)寬度增加，膠原纖維增加，染色加深；此后，病變逐漸加重。各治療組腎小管損害和腎間質(zhì)纖維化程度顯著減輕(P<0.05)。并且，L500和L200組腎小管損害百分比和腎間質(zhì)纖維化分值顯著低于L50組(P<0.05)。 MCP1免疫組化染色觀察Sham組腎間質(zhì)僅偶見個別MCP1表達(dá)。UUO模型建立后，隨著疾病進(jìn)展，MC

12、P1浸潤逐漸增多，主要集中在腎小管上皮細(xì)胞和腎間質(zhì)處。各時間點三治療組MCP1浸潤顯著少于手術(shù)組(P<0.05)。隨著治療時間延長，L500組、L200組較L50治療組能更有效的抑制MCP1浸潤(P<0.05)。 隨著病程進(jìn)展，RT—PCRUUO組MCP1和TGF-β1mRNA表達(dá)均逐漸增強(qiáng)。各組氯沙坦治療組顯著抑制MCP1和TGF—β1mRNA表達(dá)，各時間點表達(dá)顯著低于手術(shù)組(P<0.05)，并且L500組和L200組較小劑量

13、L50治療組表達(dá)明顯減弱(P<0.05)。 [小結(jié)] 1.UUO大鼠血壓增高，尿蛋白增多，氯沙坦能有效降低UUO大鼠血壓、減輕尿蛋白，隨著梗阻時間的延長，超大劑量治療組較大劑量和常規(guī)劑量治療組能更顯著降低尿蛋白；各組各時間點之間血清BUN、SCR、血鉀差異無顯著性，各治療組藥物耐受性良好，未發(fā)現(xiàn)有低血壓、高血鉀等不良反應(yīng)。 2.UUO大鼠腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤，腎小管擴(kuò)張、萎縮、壞死，腎間質(zhì)寬度增寬，腎間質(zhì)纖維化，氯

14、沙坦能減輕腎小管損害及間質(zhì)纖維化程度，大劑量和超大劑量治療組與常規(guī)劑量治療組相比，能更顯著地減輕腎小管損害及間質(zhì)纖維化程度。 3.三組氯沙坦治療組下調(diào)MCP1、TGF—β1的表達(dá)，大劑量和超大劑量治療組與常規(guī)劑量治療組相比，下調(diào)更明顯，提示ARB防治腎間質(zhì)纖維化可能是通過抑制MCP1、TGF—β1表達(dá)而發(fā)揮作用，且有一定劑量依賴關(guān)系。 [結(jié)論] 1.應(yīng)用血管緊張素II受體拮抗劑可以防治腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展。