板藍根水提物對3T3-L1細胞分化及脂質代謝作用的研究.pdf

1、目的:研究板藍根水提物(WEN)對小鼠3T3-L1前脂肪細胞增殖分化和脂肪代謝的作用，并探討其調控機制。
　　方法:(1)模型建立:觀察3T3-L1前脂肪細胞誘導分化過程前后細胞形態(tài)變化;(2)WERI對3T3-L1前脂肪細胞活力的影響:不同濃度WERI分別作用3T3-L1前脂肪細胞24、48、72h，MTT法檢測細胞活力;(3) WERI對細胞成脂分化的作用:對3T3-L1細胞進行脂肪分化誘導，誘導同時加入不同濃度WERI，油紅

2、O染色法檢測細胞分化程度，異丙醇溶解油紅O檢測脂類合成相對含量。(4) WERI對脂肪細胞分化過程中脂代謝和糖代謝作用:3T3-L1誘導分化第八天時，取細胞上清分別測定甘油三酯及葡萄糖含量;(5) WERI對脂肪細胞分化過程中基因的影響:3T3-L1前脂肪細胞誘導過程中加入不同濃度的WERI，在第八天提取總RNA，進行qRT-PCR實驗檢測脂肪細胞相關基因表達情況;(6) WERI對脂肪細胞分化及脂肪酸、膽固醇合成通路蛋白表達影響:脂肪

3、細胞分化全過程加入不同濃度WERI進行干預，分化第八天收集總蛋白，Western-blot法檢測脂肪細胞分化及能量代謝通路蛋白表達水平。
　　結果:(1)3T3-L1前脂肪細胞經(jīng)過誘導后由成纖維樣逐漸轉變?yōu)閳A形或橢圓形細胞形態(tài)，并且隨著誘導天數(shù)的增加，細胞內逐漸開始積累脂滴;(2) WERI在0～800mg·L-1的濃度范圍內作用于3T3-L1前脂肪細胞24h，均對細胞有一定程度的增殖作用;作用48h后，細胞開始表現(xiàn)為增殖抑制，但

4、除了800 mg·L-1組其他仍屬于增殖作用;作用72h后，細胞活力均開始顯著下降(P＜0.01)。(3) WERI能夠明顯抑制脂肪細胞分化，并且明顯減少細胞內脂質含量;(4) WERI能夠明顯降低培養(yǎng)液中TG含量，并減少細胞攝取葡萄糖;(5)WERI能夠顯著下調PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、FAS、ACC、GPDH的基因表達;(6)WERI能夠顯著抑制3T3-L1脂肪細胞中PPARγ、C/EBPα、FAS、FABP4、A

5、diponectin、AMPK、HMGCR及AceCS1的蛋白表達，并上調p-AMPK蛋白的表達。
　　結論:(1) WERI能夠有效抑制3T3-L1前脂肪細胞成脂分化，并能夠降低脂肪細胞脂質合成及葡萄糖攝取。(2) WERI通過下調脂肪細胞分化轉錄因子及下游靶基因的表達從而有效抑制脂肪細胞分化及脂質合成。(3) WERI能夠下調脂肪細胞分化途徑、脂肪酸合成及膽固醇合成途徑相關蛋白表達，增加能量代謝途徑蛋白激活從而抑制脂肪細胞分化