奧氮平介導(dǎo)的3T3-L1細(xì)胞SREBPs通路的脂代謝調(diào)控與藥物聯(lián)合作用.pdf

1、背景:
　　抗精神藥物為精神病的首選藥物，主要分為兩大類，第一代典型性抗精神藥物和第二代非典型性抗精神藥物。第一代抗精神藥物對(duì)精神分裂癥的陰性癥狀無明顯效果，引起藥源性錐體外系不良反應(yīng)，尤其是不可逆的遲發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙的發(fā)生，嚴(yán)重地影響了患者的服藥依從性，也妨礙社會(huì)功能的恢復(fù)。第二代抗精神藥物在作用于DA受體的同時(shí)對(duì)于5-羥色胺(5-HT)受體具有更強(qiáng)的拮抗作用，不再引起藥源性錐體外系不良反應(yīng)，但是仍有一定的副作用，比如氯氮平，但其致

2、粒細(xì)胞缺乏的發(fā)生率高達(dá)1‰～3‰，是其它抗精神病藥的50～100倍，致使臨床應(yīng)用受到明顯的限制。作為第二代抗精神藥物的代表Olanzapine對(duì)5-HT受體親和力高于DA受體的親和力，且選擇性作用于與精神活動(dòng)關(guān)系密切的中腦邊緣系統(tǒng)，因此對(duì)精神分裂癥的陰性癥狀具有良好的療效，對(duì)難治性精神分裂癥也有較好的效果，且很少引起致粒細(xì)胞缺乏。但是也引起一些不良反應(yīng)，比如脂類代謝紊亂，伴隨有血脂異常、肥胖、糖尿病、心血管疾病及炎癥等，尤其是血脂異常很

3、普遍。由于臨床還沒有可以取代Olanzapine的藥物出現(xiàn)，故Olanzapine的應(yīng)用還是很廣泛，于是在臨床上尋找與Olanzapine聯(lián)合用的，能改善抗精神病藥物誘導(dǎo)的脂代謝異常的藥物就顯得很是迫切。Olanzapine引起脂代謝紊亂具體機(jī)制還不是很清楚，現(xiàn)已有報(bào)道其副作用與H1受體、脂肪生成因子以及SREBPs途徑均有關(guān)系。最近有文獻(xiàn)稱Olanzapine的脂代謝紊亂有可能還具有反饋調(diào)節(jié)作用。
　　他汀類藥物，為降血脂的一線

4、藥物，可通過競爭性抑制HMG-CoA還原酶，在減少肝臟合成膽固醇的同時(shí)，還能增加LDLC受體數(shù)量和活性、增加血清膽固醇的清除，進(jìn)一步降低TC水平。那么能否推測他汀類藥物可以通過SREBPs相關(guān)途徑來抑制Olanzapine引起的HMG-CoA還原酶增強(qiáng)，從而干預(yù)Olanzapine引起的脂代謝變化，值得關(guān)注。
　　此外，Berberine是從小檗屬、黃連屬植物根莖中提取的一種異喹啉類季銨生物堿，主要用于腸道炎癥伴發(fā)熱，具有抗菌、止

5、瀉、抗心律失常、抗高血壓、降血脂等作用?，F(xiàn)有較多文獻(xiàn)報(bào)道Berberine降血脂效果較顯著，其具體機(jī)制還不是很清楚。有文獻(xiàn)報(bào)道通過Berberine通過調(diào)節(jié)SREBPs相關(guān)途徑（包括PPARγ和C/EBPα），抑制3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞、人類白前脂肪細(xì)胞以及高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖鼠模型中的脂肪細(xì)胞分化過程中脂肪生成。因此Berberine與Olanzapine聯(lián)合用藥，能否干預(yù)Olanzapine介導(dǎo)的3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)

6、胞脂代謝變化，從而應(yīng)用于臨床上Olanzapine引起的脂代謝紊亂，值得研究。
　　目的:
　　在3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（前脂肪細(xì)胞）水平上，建立Olanzapine誘發(fā)脂代謝的成熟脂肪細(xì)胞模型，研究Olanzapine通過SREBPs途徑誘發(fā)的脂代謝副作用，分析他汀類藥物和Berberine對(duì)其的干預(yù)作用及其分子機(jī)制。
　　方法:
　　采用MTT比色法考察DMSO、Olanzapine、Simvasta

7、tin、Atorvastatin、Berberine等對(duì)3T3-L1細(xì)胞增殖的影響，從而找出上述藥物具有較低細(xì)胞毒性的濃度范圍;利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、油紅O染色脂滴，試劑盒檢測TG、TC含量，RT-qPCR基因轉(zhuǎn)錄分析及Western blotting分析蛋白表達(dá)四個(gè)方面來考察Olanzapine是否成功誘導(dǎo)形成成熟脂肪細(xì)胞模型，并且選出最佳的Olanzapine濃度;在此基礎(chǔ)上選擇以上四個(gè)方面來研究他汀類藥物和Berberine

8、是否干預(yù)Olanzapine介導(dǎo)的脂代謝變化以及相關(guān)分子機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.Olanzapine介導(dǎo)的脂代謝變化細(xì)胞模型的建立
　　Olanzapine能促進(jìn)脂肪細(xì)胞脂滴的形成，在低于10μmol/L濃度，呈劑量依賴性，超過10μmol/L后誘導(dǎo)效果不明顯。并且在10μmol/L濃度時(shí)對(duì)TG、TC含量、基因轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)水平都有一定的下調(diào)作用。
　　2.Simvastatin對(duì)Olanzapine引起

9、的脂代謝變化的干預(yù)作用
　　在2.5μmol/L和5μmol/L Simvastatin作用下，可看到細(xì)胞形態(tài)觀察的改變以及油紅O染色脂滴數(shù)量的下降，TG、TC含量測定、基因轉(zhuǎn)錄分析及蛋白表達(dá)水平方面都進(jìn)一步驗(yàn)證了Simvastatin可以干預(yù)Olanzapine引起的脂代謝變化。
　　3.Atorvastatin對(duì)Olanzapine誘發(fā)的脂代謝變化的影響
　　在2.5μmol/L和5μmol/L Atorvasta

10、tin作用下，基本上看不到細(xì)胞形態(tài)觀察的改變以及油紅O染色脂滴數(shù)量的下降，在TG、TC含量測定、基因轉(zhuǎn)錄分析及蛋白表達(dá)水平等方面也沒有較大的變化。
　　4.Berberine對(duì)Olanzapine介導(dǎo)的脂代謝變化的效應(yīng)在1.25μmol/L和2.5μmol/L Berberine作用下，可明顯看到細(xì)胞形態(tài)觀察的改變以及油紅O染色脂滴數(shù)量的下降，TG、TC含量測定、基因轉(zhuǎn)錄分析及蛋白表達(dá)水平方面都進(jìn)一步驗(yàn)證了Berberine可以干