B類Ⅰ型清道夫受體的高表達(dá)是結(jié)腸癌患者的有利預(yù)后因素.pdf

1、研究背景:
　　結(jié)腸癌是臨床中發(fā)病率較高的疾病。近年來隨著人們生活水平的改善，結(jié)腸癌的發(fā)病率也在逐年的升高。在近年的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)在所有癌癥患者中結(jié)腸癌的發(fā)病率居全世界第3位，并且女性患者普遍高于男性患者，平均每年有數(shù)十萬的結(jié)腸癌患者死亡，因此對(duì)于結(jié)腸癌的研究和治療具有重要的臨床意義。流行病學(xué)顯示，結(jié)腸癌的發(fā)生與高脂飲食，肥胖，飲酒，缺乏鍛煉密切相關(guān)。既往研究表明，結(jié)腸癌的進(jìn)展與血脂水平異常，特別是血漿高密度脂蛋白(High-dens

2、itylipoprotein，HDL)的水平下降相關(guān)。
　　B類Ⅰ型清道夫受體(scavenger receptor class B typeⅠ，SR-BI)是第一個(gè)在分子水平上得到確證的高密度脂蛋白受體，體內(nèi)SR-BI表達(dá)相對(duì)廣泛，主要表達(dá)于肝臟和腎上腺、卵巢、睪丸等固醇激素生成組織。SR-BI是HDL中膽固醇及膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)的重要受體，參與體內(nèi)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程。SR-BI作為體內(nèi)HDL的一種生理相關(guān)性受體，除了介導(dǎo)HDL抗炎、

3、抗血栓、抗氧化等作用外，它還具有其它多種生物學(xué)作用，如在膿毒癥、丙型肝炎病毒入侵、炎癥、先天免疫、正常紅細(xì)胞成熟和雌性生育等方面都有重要的調(diào)節(jié)作用。隨后研究證實(shí)，SR-BI在某些腫瘤細(xì)胞系中高表達(dá)，包括前列腺癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌和鼻咽癌。然而，SR-BI在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況及其臨床意義尚沒有相關(guān)研究報(bào)道。
　　在本課題中，我們首先應(yīng)用生物信息學(xué)分析了脂質(zhì)代謝相關(guān)基因在結(jié)腸癌患者與正常人之間的不同表達(dá)水平以及

4、各基因與臨床病理變量的關(guān)系，證實(shí)了SCARB1是參與膽固醇內(nèi)化的5個(gè)基因中唯一在結(jié)腸癌患者中上調(diào)的基因。其次，我們利用組織芯片免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了SR-BI在90例結(jié)腸癌組織及其相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本的表達(dá)情況，分析了SR-BI的表達(dá)與患者各臨床病理變量、預(yù)后的關(guān)系，證實(shí)SR-BI的表達(dá)雖與各臨床病理變量無相關(guān)性，但是影響結(jié)腸癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　目的:
　　1.應(yīng)用生物信息學(xué)分析脂質(zhì)代謝相關(guān)基因在結(jié)腸癌患者與正常人之間的

5、不同表達(dá)水平以及各基因與臨床病理變量的關(guān)系。
　　2.采用含90例結(jié)腸癌組織及其相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本的組織芯片檢測(cè)SR-BI蛋白的表達(dá)情況。
　　3.分析SR-BI的表達(dá)與結(jié)腸癌患者各臨床病理變量之間的關(guān)系，并探討SR-BI的表達(dá)狀態(tài)與患者的預(yù)后關(guān)系，以期尋找新的結(jié)腸癌預(yù)后指標(biāo)和潛在的治療靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.以癌癥基因庫(kù)(The Cancer Genome Altas，TCGA)提供的245例結(jié)腸癌患者及21

6、例正常人的17組與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因信息為研究對(duì)象，分析脂質(zhì)代謝相關(guān)基因在結(jié)腸癌患者與正常人之間的不同表達(dá)水平以及各基因與臨床病理變量的關(guān)系。脂質(zhì)代謝相關(guān)基因在結(jié)腸癌患者與正常人之間的不同表達(dá)水平采用T檢驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。各基因與臨床病理變量的關(guān)系采用單因素方差分析進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　2.采用免疫組織化學(xué)染色的方法對(duì)購(gòu)自上海芯超生物科技有限公司的含90例結(jié)腸癌組織和相對(duì)應(yīng)的癌旁組織的芯片進(jìn)行SR-BI表達(dá)的檢測(cè)，并分析其與結(jié)腸癌癌的發(fā)生發(fā)展、

7、臨床病理特征及患者預(yù)后的關(guān)系。免疫組織化學(xué)SR-BI染色的評(píng)分由兩個(gè)獨(dú)立的病理學(xué)家進(jìn)行，屏蔽患者的臨床信息和預(yù)后情況。評(píng)分的方法應(yīng)用改進(jìn)的免疫反應(yīng)評(píng)分法（immune response scoring method，IRS），主要評(píng)價(jià)染色細(xì)胞的百分比(無染色，0;＜10％，1;10-50％，2;51-80％，3;＞80％，4)和染色強(qiáng)度（無染色，0;弱，1;中度，2;強(qiáng)，3）。染色強(qiáng)度和染色陽性細(xì)胞數(shù)比例的乘積得分（范圍從0到12）作為

8、每例患者的最終得分。在隨后的統(tǒng)計(jì)分析中應(yīng)用兩級(jí)分層。腫瘤標(biāo)本評(píng)分最后在0-4之間認(rèn)為是SR-BI低表達(dá)，而≥6認(rèn)為是高表達(dá)。SR-BI的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估，取決于不同的臨床病理參數(shù)的數(shù)值性質(zhì)和正態(tài)分布性。生存分析采用Kaplan-Meier生存分析進(jìn)行評(píng)價(jià)，并用Log-rank檢驗(yàn)各變量對(duì)生存時(shí)間(overall survival，OS)的影響。多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型來計(jì)算，

9、計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)比(hazard ratio，HR)和95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)。
　　結(jié)果:
　　1.相比于正常人，5個(gè)基因在結(jié)腸癌患者中明顯上調(diào)，SCARB1(P=0.000)，金屬蛋白酶組織抑制物1(TIMP1，P=0.000)，基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9，P=0.000)，固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子1（SREBF1，P=0.028），脂肪酸合酶(FASN，P=0.000)。9個(gè)基因在結(jié)腸癌

10、患者中明顯下調(diào)，組織蛋白酶S(CTSS，P=0.000)，膽固醇脂化微囊蛋白1(CAV1，P=0.001)，極低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(VLDLR，P=0.000)，ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)子1(ABCA1，P=0.000)，乙酰輔酶A乙酰轉(zhuǎn)移酶1(ACAT1，P=0.000)，分化抗原簇36(CD36，P=0.000)，3-羥基-3-甲基-戊二酸-輔酶A還原酶(HMG-CoAR，P=0.047)，固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子2(SREBF2，P=

11、0.001)，肝X受體激動(dòng)劑α(LXR-α，P=0.000)。
　　2.CD36(P=0.002)，CTSS(P=0.028)，VLDLR(P=0.020)在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率相關(guān)。CTSS(P=0.025)，ACAT1(P=0.006)， MMP-9(P=0.003)，HMG-CoAR(P=0.005)與T分期相關(guān)。LDLRP(P=0.041)和MMP-9(P=0.047)與腫瘤分級(jí)相關(guān)。值得注意的是SC

12、ARB1的表達(dá)水平與各臨床病理變量無關(guān)。
　　3.在90例結(jié)腸癌組織標(biāo)本中，51例(56.7％)為SR-BI高表達(dá)，39例(43.3％)為SR-BI低表達(dá)。在90例相對(duì)應(yīng)的癌旁組織中，48例(53.3％)為SR-BI高表達(dá)，42例(46.7％)為SR-BI低表達(dá)。SR-BI在大多數(shù)結(jié)腸癌組織比相對(duì)應(yīng)的癌旁組織表達(dá)高(P=0.000)。
　　4.與SCARB1的表達(dá)水平與各臨床病理變量無關(guān)的結(jié)果一致，SR-BI的表達(dá)水平與性別

13、、年齡、腫瘤pTNM分期、腫瘤大小、腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)總數(shù)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率、AJCC臨床分期無關(guān)。
　　5.在結(jié)腸癌組織中，SR-BI低表達(dá)的患者比SR-BI高表達(dá)的患者總體生存率(0S)縮短（log-rank檢驗(yàn)，P=0.042）。Cox回歸多因素分析提示SR-BI的高表達(dá)是影響預(yù)后的獨(dú)立有利因素，HR為0.502(P=0.039)，除了SR-BI之外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽性率也是結(jié)腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P=0.007)。

14、　　結(jié)論:
　　1.基因SCARB1的表達(dá)水平在結(jié)腸癌患者中上調(diào)。
　　2.結(jié)腸癌組織SR-BI表達(dá)水平比癌旁組織高。
　　3.結(jié)腸癌組織中SR-BI的表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者的生存相關(guān)。SR-BI表達(dá)水平越低，預(yù)后越差。
　　4.結(jié)腸癌組織中SR-BI的表達(dá)水平是結(jié)腸癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　研究意義:
　　SR-BI的低表達(dá)狀態(tài)與結(jié)腸癌患者不良預(yù)后有關(guān)，SR-BI的表達(dá)可能被作為結(jié)腸癌的惡性指標(biāo)之一