沙利度胺聯(lián)合干擾素治療血液惡性腫瘤體內(nèi)作用機制初步研究.pdf

1、目的:
　　血液惡性腫瘤是一組起源于造血/淋巴組織造血干/祖細胞的惡性克隆性疾病，具有高度異質(zhì)性，治療及預(yù)后受到多種因素的影響。隨著診療水平的不斷提高，該群體患者誘導(dǎo)緩解率及5年生存率有了顯著提高，但誘導(dǎo)治療失敗或復(fù)發(fā)仍困擾著相當(dāng)大的一部分患者，同時也給臨床工作者帶來了巨大的挑戰(zhàn)。大量的數(shù)據(jù)顯示，對于這部分復(fù)發(fā)/難治性血液惡性腫瘤患者，即使給予強烈的化療方案，其預(yù)后仍較差。分子生物學(xué)的發(fā)展使各種小分子物質(zhì)和單克隆抗體靶向治療不斷出

2、現(xiàn)，但它們多為臨床試驗藥物且價格昂貴。另外，一部分老年、體能狀況較差的患者無法耐受傳統(tǒng)的細胞毒化療。因此，如何有效的降低血液惡性腫瘤的復(fù)發(fā)率，如何為復(fù)發(fā)/難治性及體能或經(jīng)濟承受能力欠佳的血液惡性腫瘤患者探索出一種經(jīng)濟且安全有效的挽救性治療方案具有重要意義。文獻報道沙利度胺(Thalidomide，Thal)及重組人干擾素α-1b(Recombinant humaninterferon a-1b，rhIFNα-1b)對多種血液腫瘤均具有直

3、接抑制及間接的免疫調(diào)節(jié)功能。我們通過前期的臨床研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺聯(lián)合rhIFNα-1b對急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)、復(fù)發(fā)/難治性套細胞淋巴瘤(Mantle celllymphoma，MCL)、多發(fā)性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)等均有確切的療效。但目前對二者聯(lián)合治療血液惡性腫瘤的體內(nèi)作用機制尚不明確。因此，我們試圖通過本課題觀察二者對該群體患者外周血淋巴細胞亞群、NK細胞顆粒酶

4、B(Granzyme-B)、穿孔素(Perforin)的表達以及血漿中血管內(nèi)皮細胞生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)、γ干擾素（Interferon-γ，INF-γ）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)等細胞因子水平的影響，以期能更好地理解該方案的作用機制，最終使其能更好地造福部分患

5、者群體，并為臨床應(yīng)用提供進一步的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.患者來源、標(biāo)本采集及初步處理:
　　以2016年3月至2017年3月河南省腫瘤醫(yī)院及河南省部分地市級醫(yī)院血液科收治的初治或復(fù)發(fā)/難治性血液惡性腫瘤，受體能狀況或經(jīng)濟狀況限制而自愿接受沙利度胺聯(lián)合rhIFNα-1b為基礎(chǔ)的方案治療者為研究對象。采集患者用藥前1天及規(guī)范用藥3月后的晨起空腹外周血標(biāo)本各4ml于EDTA-K3抗凝的真空管中。其中2ml于4℃冰箱內(nèi)

6、保存，24小時內(nèi)進行流式細胞術(shù)檢測前處理，并于72小時內(nèi)進行外周血淋巴亞群及NK細胞Granzyme-B及Perforin的表達水平的檢測;另2ml于無菌條件下迅速分離血漿并將血漿凍存于-80攝氏度的冰箱中備用。
　　2.具體治療方案為:沙利度胺起始劑量為每天100 mg，睡前頓服，根據(jù)患者耐受情況可逐漸增加至每天200 mg，同時酌情給予復(fù)方丹參片或者阿司匹林片預(yù)防深靜脈血栓形成;rhIFNα-1b針劑60ug，皮下注射，隔天1

7、次，每次應(yīng)用前30 min給予布洛芬顆?？诜A(yù)防其引起的藥物性發(fā)熱，后期如可耐受，可停用退熱藥物;其中急性髓系白血病患者聯(lián)合應(yīng)用IL-2針劑50 IU，皮下注射，1次/d。對伴有FLT3-ITD突變陽性的急性髓系白血病患者給予索拉非尼400mg2次/d口服。所有患者治療前均通過鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。
　　3.流式細胞術(shù)檢測外周血淋巴細胞亞群及NK細胞GranzymeB及Perforin表達水平的檢測
　　查閱相

8、關(guān)文獻，制定相應(yīng)的淋巴亞群檢測panel(詳見下文)。按流式細胞術(shù)檢測要求常規(guī)處理標(biāo)本并進行外周血淋巴亞群及NK細胞GranzymeB及Perforin的表達的檢測，即膜表面抗原染色-溶血-洗滌-透膜與固定-細胞內(nèi)抗原染色-洗滌-上機檢測。
　　4.微量樣本多重定量技術(shù)(Cytometric Bead Array，CBA)檢測血漿中血管內(nèi)VEGF、INF-γ、 TNF-α、IL-6等4種細胞因子
　　嚴(yán)格按照BD CBA F

9、lex Sets說明書進行標(biāo)本處理及樣本獲取，并使用FCAPArray軟件來進行結(jié)果分析。
　　5.對照組的設(shè)計
　　根據(jù)所收集患者臨床資料特征，從本院體檢中心選取與之相匹配的健康體檢者35例，進行同樣的標(biāo)本處理及檢測，作為正常對照。
　　6.統(tǒng)計學(xué)分析
　　應(yīng)用SPSS17.0軟件，采用配對t檢驗對數(shù)據(jù)進行分析統(tǒng)計，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.與健康對照組相比:治療前患者

10、外周血CD4+/CD8+、NK細胞比例、NK細胞Perforin及Granzyme-B的表達水平均較健康對照者低（分別為0.77±0.41 vs1.26±0.33;7.40±6.63vs9.13±5.58;11.61±7.39vs13.16±7.01;13.54±7.59vs17.11±8.53），外周血血漿中VEGF、IL-6及TNF-α水平較健康對照組高，（分別為:61.53±30.71vs5.17±3.09;8.58±3.59vs

11、3.81±2.90;8.60±5.97vs3.22±1.91），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;INF-γ較健康對照組低(10.53±8.93 vs13.01±7.23)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.治療前后相比:接受沙利度胺聯(lián)合rhIFNα-1b治療3個月后，患者外周血CD4+/CD8+比例、NK細胞比例、NK細胞Perforin及Granzyme-B的表達水平較用藥前升高（分別為:1.01±0.37vs0.77±0.41;10.00±8.

12、51vs7.40±6.63;14.21±6.70vs11.61±7.39;17.99±11.38vs13.54±7.59），外周血血漿中INF-γ較前升高，VEGF較治療前下降（分別為:27.52±16.55vs10.53±8.93;40.96±38.56vs61.53±30.71），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;外周血CD3+CD4+及CD3+CD8+淋巴細胞比例及血漿中TNF-α水平較前升高，IL-6水平較前降低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。