乙酰膽堿酯酶(AChE)缺失對年齡相關(guān)性黃斑變性疾病(AMD)的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討乙酰膽堿酯酶缺失對年齡相關(guān)性黃斑變性疾病的細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞株（ARPE19）至對數(shù)生長期，加入碘酸鈉濃度梯度：0.1mM，1mM，10mM。培養(yǎng)24h后，進(jìn)行乙酰膽堿酯酶（AchE）免疫熒光檢測及MTT法進(jìn)行細(xì)胞活力檢測，找出最佳濃度。然后體外實(shí)驗(yàn)，沉默人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞株（ARPE19）的AChE基因及預(yù)處理乙酰膽堿酯酶抑制劑（AchEI）多奈哌齊兩種方法；體外實(shí)驗(yàn)采用ACh

2、E-/+和AChE+/+老鼠經(jīng)尾靜脈注射25mg/kg碘酸鈉，之后進(jìn)行AChE、Cleaved Caspase-3的免疫熒光、TUNEL法檢測凋亡數(shù)量、Cell ROS及提取各實(shí)驗(yàn)組的蛋白后用蛋白印跡法檢測各實(shí)驗(yàn)組AChE、Cleaved Caspase-3和NOX2表達(dá)量。
　　結(jié)果：MTT值，碘酸鈉組的細(xì)胞活力明顯低于對照組，且具濃度依賴性。碘酸鈉組的乙酰膽堿酯酶（AChE）表達(dá)量也明顯高于對照組，且具有濃度梯度性，差異具有統(tǒng)

3、計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。TUNEL法細(xì)胞凋亡數(shù)明顯少于對照組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。蛋白印跡和免疫熒光檢測得出在體外體內(nèi)缺失AChE后，NOX2表達(dá)量也相應(yīng)少于對照組，Cell ROS實(shí)驗(yàn)也證明其ROS含量也相應(yīng)少于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明其氧化應(yīng)激反應(yīng)被抑制。
　　結(jié)論：碘酸鈉誘導(dǎo) ARPE19細(xì)胞凋亡過程中，乙酰膽堿酯酶表達(dá)量增高，且具有濃度梯度性。缺失 AChE后，其凋亡細(xì)胞數(shù)量減少