農(nóng)藥靶標(biāo)乙酰膽堿酯酶的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、乙酰膽堿酯酶是昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)中最重要的酶系之一，在中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)中與乙酰膽堿(ACh)受體一起參與完成神經(jīng).神經(jīng)及神經(jīng).肌肉突觸之間動作電位的傳遞，其主要生理功能是催化水解陽離子性神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿。目前，天然產(chǎn)物活性物質(zhì)中，研究最清楚的是AChE的酯動部位抑制劑毒扁豆堿，以其為模板合成的氨基甲酸酯類農(nóng)藥，已經(jīng)成為農(nóng)藥生產(chǎn)上一種主要?dú)⑾x劑，有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶(AChE)有強(qiáng)烈的抑制作用，主要是它們能夠與AChE的活性

2、部位快速不可逆地結(jié)合，使酶失活，從而引起中毒，起到殺蟲的作用。因此，提取分離純化害蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶并用于天然產(chǎn)物農(nóng)藥體外篩選乃至高通量篩選是研制新一代農(nóng)藥十分有效的方法。本文主要對粗酶液的提取條件進(jìn)行了研究，采用了Sephadex G-25層析，DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析和SephacrylS-200凝膠過濾層析，對鱗翅目模式生物昆蟲家蠶的頭部粗酶提取液中的乙酰膽堿酯酶進(jìn)行純化及純化前后酶學(xué)性質(zhì)研究，

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明家蠶頭部乙酰膽堿酯酶的粗酶最適提取緩沖液條件為：1％Trition X-100，pH 8.0。在堿性pH條件下發(fā)現(xiàn)了底物(ATChI)的自身水解現(xiàn)象，出現(xiàn)在反應(yīng)體系pH值大于8.5之后。純化后得到的樣品經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和SDS-PAGE檢測均為一條帶，用SDS-PAGE法測得其分子量為77.8 kDa。酶的最適反應(yīng)溫度為37℃，最適pH為7.5，對底物碘化硫代乙酰膽堿(ATChI)的Km值為0.392 mmo