牛外周血樹突狀細(xì)胞亞群鑒定及抗原靶向遞呈研究.pdf

1、樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)是專職的抗原遞呈細(xì)胞，研究DCs細(xì)胞的表型與功能將為提高獲得性免疫應(yīng)答效力的方法研究提供理論依據(jù)。本論文旨在鑒定牛外周血中表達(dá)趨化因子受體XCR1和C型凝集素受體Clec9A的DCs細(xì)胞，分析XCR1+/Clec9A+DCs的表型特征及其在牛傳統(tǒng)DC(cDCs)群體中cDC1和cDC2亞群中的分類地位;研究DCs表面受體的配體和抗體介導(dǎo)的抗原靶向遞呈方法，為抗原靶向性動(dòng)物分子疫苗設(shè)計(jì)提

2、供思路。利用磁珠分選、多色流式細(xì)胞術(shù)分析和qRT-PCR定量等方法鑒定了牛外周血XCR1+/Clec9A+ DCs的類群。結(jié)果表明:牛XCR1與Clec9A主要表達(dá)于CD26+CADM1+CD205+MHCⅡ+CD11c+CD11b-CD4-CD8-CD163-lin-DC細(xì)胞，代表cDCs的一類，而非漿性DC(pDCs)。牛外周血中cDCs可進(jìn)一步劃分為CD26+CD172a-CD11c+MHCⅡ+lin-DC和CD26-CD172a

3、+CD11c+MHCⅡ+lin-DC，分別代表cDCl和cDC2。同樣的方法證實(shí):牛XCR1的配體XCL1主要表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞(NK)以及活化的CD8+T細(xì)胞上。趨化實(shí)驗(yàn)表明:鼠XCL1能夠趨化牛外周血XCR1+ DC的遷移。利用化學(xué)合成截短的牛XCL蛋白進(jìn)行磁珠缺失分選和qRT-PCR分析，結(jié)果表明:牛XCL1二硫鍵片段是結(jié)合XCR1受體的關(guān)鍵區(qū)域。
　　研究中使用O型FMDV多表位重組蛋白(OB7)為模式抗原，設(shè)計(jì)表達(dá)了融合

4、XCL1的靶向抗原分子XCL-OB7及突變體ΔXCL-OB7，在牛體評(píng)價(jià)了XCL1介導(dǎo)抗原靶向免疫效果。結(jié)果表明:XCL-OB7可顯著增強(qiáng)針對(duì)O型FMDV的中和抗體應(yīng)答水平;XCL-OB7免疫組比ΔXCL-OB7免疫組牛產(chǎn)生了較高水平的FMDV特異性抗體，差異顯著(P＜0.05);相反，將Poly(I∶C)和XCL-OB7組合免疫牛則明顯抑制了體液免疫應(yīng)答水平。使用10000 BID50的O型Mya98 FMDV攻毒，結(jié)果顯示，單獨(dú)免疫

5、1mg或0.1mg XCL-OB7組，以及1 mgΔXCL-OB7加poly(I∶C)組均獲得了80％(4/5)保護(hù)率;單獨(dú)免疫1 mgΔXCL-OB7組與1 mg XCL-OB7和poly(I∶C)組分別獲得60％和40％的保護(hù)率;滅活疫苗組對(duì)照獲得100％保護(hù)率;PBS對(duì)照組全發(fā)病。Poly(I∶C)與ΔXCL-OB7組合免疫組相對(duì)于XCL-OB7單獨(dú)免疫組，可明顯阻斷病毒的復(fù)制，攻毒后10天測(cè)定FMDV非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率顯著低于

6、XCL-OB7單獨(dú)免疫組（P＜0.01），說明DC活化誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫對(duì)阻斷FMDV的復(fù)制至關(guān)重要。此外，本研究中利用合成多肽免疫小鼠的方法，成功制備出了三株具有較好親和力的抗牛Clec9A小鼠單克隆抗體，為抗體介導(dǎo)的抗原靶向遞呈研究奠定了基礎(chǔ)。
　　綜合以上研究結(jié)果得出:1）牛外周血中表達(dá)XCR1和Clec9A受體的DC是CD26+CADM1+CD205+CD11c+CD11b-CD4-CD8-CD163-lin-cDC;2)牛X