仙靈骨葆方中三個(gè)主要活性成分的在體腸吸收特征研究.pdf

1、仙靈骨葆是由淫羊藿、補(bǔ)骨脂、續(xù)斷、知母、丹參和地黃六味中藥組成的復(fù)方制劑，臨床上主要用于防治和治療骨質(zhì)疏松癥且療效顯著。本文采用超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器（UPLC-PDA），首先，采用大鼠在體單向腸灌流技術(shù)開(kāi)展了復(fù)方仙靈骨葆中主要活性成分的腸吸收特征初步研究，根據(jù)各成分的腸吸收參數(shù)值，選擇三個(gè)在小腸段消除率高且入血的活性成分：補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和淫羊藿苷做為指標(biāo)成分，開(kāi)展指標(biāo)成分在復(fù)方仙靈骨葆、缺地黃陰性復(fù)方（地黃對(duì)復(fù)方入血成

2、分貢獻(xiàn)最?。挝端幰蜣胶脱a(bǔ)骨脂（對(duì)復(fù)方入血成分貢獻(xiàn)最大的兩個(gè)藥味）以及單體的腸吸收動(dòng)力學(xué)及差異研究。
　　首先，對(duì)仙靈骨葆在體腸吸收研究的相關(guān)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了考察和確認(rèn)；對(duì)仙靈骨葆經(jīng)大鼠在體單向腸灌流后峰面積發(fā)生變化的主要色譜峰進(jìn)行對(duì)照品指認(rèn)，共指認(rèn)十一個(gè)原型成分，大多來(lái)自淫羊藿和補(bǔ)骨脂兩個(gè)藥味的貢獻(xiàn)；在此基礎(chǔ)上，選擇其中峰面積變化較大的八個(gè)主要活性成分進(jìn)行了腸吸收特征的初步考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿

3、定C、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素以及丹酚酸B七個(gè)成分的消除率在13％到73%之間，提示這些化合物在小腸段可以不同程度地被消除，補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素和淫羊藿苷是其中消除程度最大的三個(gè)主要活性成分，提示這三個(gè)成分可能是仙靈骨葆的潛在藥效物質(zhì)；淫羊藿次苷II在小腸段平均增加率高達(dá)78%，提示仙靈骨葆中一些成分可能在小腸段發(fā)生明顯的代謝轉(zhuǎn)化生成淫羊藿次苷II。
　　基于上述研究，選擇對(duì)于復(fù)方仙靈骨葆腸吸收貢獻(xiàn)大的兩個(gè)藥味淫羊藿和補(bǔ)骨脂中的三個(gè)主

4、要腸吸收和入血活性成分淫羊藿苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素作為考察指標(biāo)，建立其在體腸吸收定量方法。采用UPLC-PDA技術(shù)，選擇芒柄花黃素為內(nèi)標(biāo)，采用Acquity UPLC BEH Shield RP18色譜柱(2.1×50 mm，1.7μm)，流速0.60 ml/min，柱溫35℃，以乙腈-水（各含0.1%的甲酸）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示，該方法的專(zhuān)屬性良好，淫羊藿苷在0.18-120μg/mL、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素在0.

5、50-60μg/mL范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性；各成分的定量下限的RE不大于9.0%，RSD不大于4.3%；準(zhǔn)確度和精密度結(jié)果表明，各成分的RE在-6.3%~5.8%，批內(nèi)RSD不大于4.2%，批間RSD不大于6.9%，說(shuō)明準(zhǔn)確度和精密度良好；提取回收率均在72.00%之上且較穩(wěn)定，樣品穩(wěn)定性良好，符合生物樣本分析要求。
　　采用針對(duì)上述三個(gè)活性成分建立的定量方法，對(duì)復(fù)方仙靈骨葆、缺地黃的陰性復(fù)方、單味藥（淫羊藿、補(bǔ)骨脂）、相關(guān)入血活

6、性成分單體（淫羊藿苷、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素），開(kāi)展了大鼠在體腸吸收特征及差異研究。腸吸收特征參數(shù)的結(jié)果如下：在小腸主要吸收腸段，淫羊藿苷在單體、單味藥、復(fù)方和陰性復(fù)方中的平均Ka值分別是0.1951 min-1、0.0768 min-1、0.1031 min-1和0.1132 min-1；平均Papp值分別是0.0693 cm/min、0.0090 cm/min、0.0137 cm/min和0.0143 cm/min；其平均Mab%值分

7、別為87%、30%、41%和43%。補(bǔ)骨脂素在單體、單味藥、復(fù)方和陰性復(fù)方中的平均Ka值分別是0.2139 min-1、0.1251 min-1、0.1359 min-1和0.1571 min-1；平均Papp值分別是0.0481 cm/min、0.0192 cm/min、0.0221 cm/min和0.0242 cm/min；其平均Mab%值分別為69%、46%、47%和48%。異補(bǔ)骨脂素在單體、單味藥、復(fù)方和陰性復(fù)方中的平均Ka值分

8、別是0.2106 min-1、0.1238 min-1、0.1343 min-1和0.1576 min-1；平均Papp值分別是0.0443 cm/min、0.0187 cm/min、0.0214 cm/min和0.0244 cm/min；其平均Mab%值分別為68%、45%、49%和48%。復(fù)方組與其他各組相比，三個(gè)指標(biāo)成分的腸吸收參數(shù)上表現(xiàn)出一定差異，提示仙靈骨葆的藥味配伍或成分間的協(xié)同作用可能導(dǎo)致了這種差異。復(fù)方仙靈骨葆和缺地黃陰

9、性復(fù)方相比，三個(gè)指標(biāo)成分的腸吸收特征參數(shù)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明地黃未表現(xiàn)出對(duì)三個(gè)指標(biāo)成分腸吸收方面的作用，但在主要吸收腸段的吸收曲線(xiàn)，復(fù)方比陰性復(fù)方更平緩，提示地黃作為佐使藥可能具有促進(jìn)藥效成分平穩(wěn)吸收的作用。在指標(biāo)成分淫羊藿苷的吸收上，單體的平均Mab%高達(dá)87%（其中約有64%發(fā)生了代謝轉(zhuǎn)換），而復(fù)方相比單體，其平均 Mab%只有41%，復(fù)方中的Ka和 Papp值顯著減小且有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.01），以上結(jié)果表明仙靈骨葆可以顯著

10、減緩單體淫羊藿苷在腸道迅速消除的現(xiàn)象，可能使淫羊藿苷在腸道的作用時(shí)間延長(zhǎng)。復(fù)方仙靈骨葆相比于單味藥淫羊藿，指標(biāo)成分淫羊藿苷的Ka和Papp在十二指腸和回腸段有一定增加且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＜0.05），且復(fù)方相比于單味藥其平均 Mab%增加10%，表明仙靈骨葆相比單味藥抑制淫羊藿苷在腸道消除的作用減弱，這可能與復(fù)方的配伍有關(guān)。在指標(biāo)成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的吸收上，復(fù)方仙靈骨葆與單味藥補(bǔ)骨脂相比未能表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；但與單體補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨

11、脂素相比，腸吸收參數(shù)Ka和Papp具有較顯著減小的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，結(jié)果提示復(fù)方仙靈骨葆以及單味藥補(bǔ)骨脂，由于含多種結(jié)構(gòu)類(lèi)型化合物，相比于單體，可能表現(xiàn)出了抑制小腸段對(duì)補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的吸收。
　　本論文對(duì)復(fù)方仙靈骨葆的腸吸收特征進(jìn)行了研究，為揭示該復(fù)方潛在的藥效成分及其腸吸收動(dòng)力學(xué)特征，提供了一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；通過(guò)不同組別的腸吸收特征參數(shù)比較研究，初步探討了復(fù)方的配伍或成分間協(xié)同作用對(duì)藥效成分的腸吸收特征可能存在的潛在影響，為進(jìn)一步理